菜单
  


    仪器设备
    试管、24孔板、96孔板、移液管(5mL、10mL)、移液枪(20μL、100μL、1000μL)、三角瓶(500 ml 、250ml、100ml)、烧杯、量筒、玻璃棒、锥形瓶、精密pH计、灭菌锅、煤气灯、二氧化碳培养箱、恒温摇床、生物安全柜、低温保存箱。
    2.2    拟采取的方法
    扩菌:取5毫升LB液体培养基放入试管,接种一个单菌落,将试管放入37℃、200rpm的恒温摇床中过夜培养16小时。
    接种:菌液以1:1000的比例接种到液体培养基中。
    CFU:取20ul加入180μL无菌水中进行一定梯度的稀释,然后取10μL菌液加入已倒好LB固体培养基的24孔板中,轻微地摇晃均匀。放入37℃培养箱中静置培养,半小时后倒置。培养20小时左右拿出计数。
    2.3    拟定的实验方案
    9mL体系,LB液体培养基,接种野生型top10F',三个pH(5.7、6.5、7.4),四个IPTG浓度(0、0.05、0.1、1mM),30℃、240rpm培养35h,期间取样14次,测CFU。
    取12支试管并编号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12(其中1、5、9号管为对照),按表2.1所示加样。
    表2.1 加样表
    管号    1    2    3    4    5    6    7    8    9    10    11    12
    LB(mL)    9    9    9    9    9    9    9    9    9    9    9    9
    pH    5.7    5.7    5.7    5.7    6.5    6.5    6.5    6.5    7.4    7.4    7.4    7.4
    IPTG(μL)    0    4.5    9    90    0    4.5    9    90    0    4.5    9    90
    菌液(μL)    9    9    9    9    9    9    9    9    9    9    9    9
    A.比较在不同pH值的培养基中的生长现象
    分别配制pH5.7,pH 6.5,pH7.4 的液体培养基与固体培养基。
    培养基按表2.2和表2.3所示配方配好后,放入121℃灭菌锅中灭菌20分钟,拿出后冷却至50℃左右(用手摸着不烫),按稀释一千倍的比例加入卡那霉素,摇匀备用。LB固体培养基加好卡那霉素后倒入24孔板中,凝固后倒置备用。
    培养基的pH值用pH计测量。pH计的使用方法为:预先将厂家附赠的试剂粉末配置好pH6.86和pH4.13的溶液,测量当下液体温度并在pH计上显示的温度调整到当下温度,将测定模式切换到pH测量,将电极棒浸入pH为6.86的溶液中轻轻搅动,待数值稳定后将定位数值调到6.86后用蒸馏水冲洗电极棒,然后将电极棒浸入pH为4.13的溶液中轻轻搅动至数值稳定后将斜率的数值调到4.13,然后就可以测定培养基的pH值了。可使用盐酸和氢氧化钠调节pH值
  1. 上一篇:乙醛脱氢酶提取工艺的研究+文献综述
  2. 下一篇:月季营养生长对生殖生长影响
  1. 细菌群体感应模型的建立...

  2. 利用水稻Ⅱ-32BA7444组合由...

  3. 水稻自然群体材料穗瘟抗...

  4. 细菌群体感应lux启动子的调控机制研究

  5. 铜纳米粒子在邻苯二酚紫...

  6. 电化学可聚合物的阳离子...

  7. 基于SSR的不同群体鳜遗传多样性初步研究

  8. 乳业同业并购式全产业链...

  9. java+mysql车辆管理系统的设计+源代码

  10. 中考体育项目与体育教学合理结合的研究

  11. 电站锅炉暖风器设计任务书

  12. 大众媒体对公共政策制定的影响

  13. 河岸冲刷和泥沙淤积的监测国内外研究现状

  14. 酸性水汽提装置总汽提塔设计+CAD图纸

  15. 杂拟谷盗体内共生菌沃尔...

  16. 当代大学生慈善意识研究+文献综述

  17. 十二层带中心支撑钢结构...

  

About

751论文网手机版...

主页:http://www.751com.cn

关闭返回