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1.3 方法
1.3.1 活血丹生长指标测定
采收前,每盆随机选取3株进行测定,叶片长度与宽度、叶柄长度均选取植株基部往上数第3节处叶片,采用直尺测量;株高是植株基部到最高部位的距离,采用直尺测量;茎节间距离选取植株基部往上第3-4节间,用直尺测量;茎粗选取植株基部往上第3节基部,用游标卡尺测量。
1.3.2 活血丹生理指标测定[23]
(1)叶绿素含量测定 浸提法。取活血丹叶片0.2g,剪碎,放于25mL试管中,每管加入20mL 95% 乙醇,不时振荡,保证叶片被液体完全浸泡后,放置24h,至绿色消失。取上清液,以95%乙醇为空白,在波长665 nm、649 nm和470 nm处侧吸光值。
(2)可溶性糖含量测定 蒽酮比色法。取叶片0.3g于刻度试管中,加入5-10 mL蒸馏水,塑料薄膜封口,于沸水中提取30 min(提取2次),提取液过滤入25 mL 容量瓶中,用蒸馏水反复漂洗试管及残渣并定容至刻度。吸取样品提取液0.5 mL 于20 mL 刻度试管中,加蒸馏水1.5 mL,按标准曲线制作测定吸光度,计算可溶性糖的含量。
标准曲线的制备 取6支20 mL刻度试管(编号为1、2、3、4、5、6),依次加入100 ug/L蔗糖液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL,蒸馏水2.0、1.8、1.6、1.4、1.2、1.0 mL,然后按顺序向试管中加入0.5 mL蒽酮乙酸乙酯试剂和5 mL 浓硫酸,充分振荡,立即将试管放入沸水浴中,逐管均准确保温1 min,取出后自然冷却至室温,以空白作参比,在630 nm 波长下测其吸光度,以糖含量为横坐标,以吸光度为纵坐标,求得标准曲线为Y=0.0053x-0.0058,R2=0.9978。
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