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2.2.3 发酵液中的硫酸软骨素的提取 12
2.2.4 发酵液中硫酸软骨素的提取条件优化 12
2.2.5 阳离子交换树脂纯化硫酸软骨素 13
2.2.6 硫酸软骨素制品纯度的高效液相色谱分析 13
2.2.7 发酵液中硫酸软骨素的单糖组分分析 14
2.2.8 葡聚糖凝胶色谱测定发酵液中硫酸软骨素的分子量 14
2.2.9 发酵液中硫酸软骨素的硫含量测定 14
3 结果与分析 15
3.1 正交试验优化种子和发酵条件 15
3.2 发酵液中的硫酸软骨素的提取 16
3.3 发酵液中硫酸软骨素的提取条件优化 17
3.3.1 碱量对硫酸软骨素提取率的影响 17
3.3.2 酶量对硫酸软骨素提取率的影响 17
3.3.3 醇沉时间对硫酸软骨素提取率的影响 18
3.3.4 硫酸软骨素提取条件的正交试验 18
3.4 阳离子交换树脂纯化硫酸软骨素 20
3.5 硫酸软骨素制品纯度的高效液相色谱分析 20
3.6 发酵液中硫酸软骨素的单糖组分分析 21
3.7 葡聚糖凝胶色谱测定发酵液中硫酸软骨素的分子量 22
3.8 发酵液中硫酸软骨素的硫含量测定 23
4 结论 24
致 谢 25
参考文献 26
1 前言
1.1 硫酸软骨素的组成、分布、结构和生化特性
硫酸软骨素(Chondroitin Sulfate, CS)是一种酸性粘多糖，分布于软骨、肌腱、韧带、肌膜和血管壁、椎间盘等结缔组织中，是哺乳动物结缔组织的主要成分之一[3]。CS广泛存在于人和一些动物的软骨组织中，且通过共价键与核心蛋白质相结合[4]。天然存在的或是从动物软骨组织中提取的硫酸软骨素一般是白色或微黄色的粉末，具有很强的吸水性，易溶于水而不溶于甲醇、乙醇、乙醚、氯仿、丙醇、丙酮和冰乙酸等有机溶剂，溶于水后可形成黏稠状的液体。由于其分子中含有多个硫酸基和羧基，故呈酸性反应，可与钾、钠、钙离子结合成盐，其盐类对热较稳定[2]。研究发现硫酸软骨素的相对分子质量在10 000~50 000之间。目前已知的硫酸软骨素具有多种异构体，市场上药用的硫酸软骨素主要是A和C两种异构体，这两种异构体（A和C）均以D-葡萄糖醛酸、N-乙酰-D-氨基半乳糖硫酸酯为基本单位组成，只是硫酸酯，即酯化的硫酸基团在4（A型）或6（C型）位的位置不同，一般而言，硫酸软骨素含有50~70个双糖基本单位。根据双糖单位的不同分为A、B、C、D、E、F等种类