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摘要：从患病鲫鱼心脏分离获得一株细菌，编号为X2，革兰氏染色实验表明X2菌株为革兰氏阴性短杆菌。通过对该菌的形态学观察、理化特征分析初步判定为气单胞菌属。进一步采用PCR方法扩增X2菌株16S rRNA，将其亚克隆至pMD18-T载体中测序获得长度为1531bp，经过blast比对发现X2菌株与文隆气单胞菌（EU770287）同源性最高达到99.93%，进一步构建系统进化树，结果表明X2细菌与文隆气单胞菌自然聚为一支，最终将X2菌株鉴定为文隆气单胞菌(Aeromonas veronii)。采用43种抗生素进行药敏试验，结果表明X2菌株对万古霉素、替考拉宁、氨苄西林、制菌霉素、羧苄青霉素、阿莫西林、林可霉素、克林霉素、甲硝唑等抗生素耐药；对氟苯尼考、萘啶酸、奥复星、诺氟沙星、头孢噻肟、氟啶酸、恩诺沙星、左氧氟沙星、培氟沙星等抗生素敏感，为鱼源文隆气单胞菌的生物防治提供一定理论参考。32515
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毕业论文关键词：文隆气单胞菌；16S rRNA；药敏试验；鲫鱼
Isolation and Antibiotic Susceptibility testing of one Aeromonas veronii from fish
Abstract: A bacterium was isolated from the liver crucian and named X2, The isolate was identified by physical,bacterial morphology and chemical characteristics, 16S rRNA sequencing and phylogenetic analysis. The results showed that X2 strain is Gram-negative short-rod shaped bacillus, The 16S rRNA of X2 strain was amplified by PCR, and subcloned into pMD18-T vector, its sequencing was 1531 bp in length. Phylogenetic tree showed that strain X2 has high homology of 99.93% with Aeromonas veronii Taken together. of the isolate X2 was identified as Aeromonas veronii. The susceptibility testing was performed by using 43 kinds of antibiotics, and results showed that strain X2 is sensitive to florfenicol,nalidixic acid,ofloxacin tablets, norfloxacin,cefotaxime sodium, enoxacin,enrofloxacin, levofloxacin tablets,pefloxacin.
Key words: Aeromonas veronii; 16S rRNA；antibiotic sensitivity; Carassius auratus
目录
摘要 1
引言 4
实验部分 5
1 材料与仪器 5
1.1 供试材料 5
1.2 实验试剂 5
1.3 实验仪器 5
2 方法与步骤 5
2.1菌种的分离与纯化 5
2.2革兰氏染色 5
2.3 16S rRNA序列及系统发育树分析 5
2.4 生化实验 6
2.5 药敏实验 6
结果与结论 6
3.1结果 6
3.1.1菌种的分离与纯化 6
3.1.2革兰氏染色 7
3.1.3 16S rRNA序列及系统发育树分析 7
3.1.4生化实验 8
3.1.5 药敏实验 8
3.2 结论与讨论 10
致谢 11
参考文献 11
引言：
文隆气单胞菌(Aeromonas veronii)属于弧菌科(Vibronaceae)气单胞菌属 (Aeromonas),也被称为文罗纳气单胞菌和文氏气单胞菌[1-2]。是近年来发现和鉴定的一个气单胞菌新品种，是一种人和动物共患病原菌。能够引起人的急性腹泻、脑膜炎、胃肠炎和菌血症等；并且会对水生动物产生致病性，引起发病和死亡。在国外有许多关于文隆气单胞菌诱发的鱼类流行溃疡综合症的报道，国内也曾经在患病的水生动物如泥鳅、青虾、中华绒螯蟹等动物体内分离出文隆气单胞菌[3-4]。
气单胞菌中运动性气单胞菌是构成淡水鱼类肠道中的正常菌群,而豚鼠、嗜水气单胞菌和温和气单胞菌已经被确认是多种水产动物重要的病原菌,经常给水产养殖生产带来较大经济损失[6]。目前在国内南方长江流域一带是国内水产养殖的重地，水系众多，文隆气单胞菌已经成为水产养殖户的心腹大患，尤其是其能引起的流行性水生动物疾病更是最为令人担忧。近年来，文隆气单胞菌对水产动物的危害日益严重，让人们渐渐重视文隆气单胞菌，该菌会引起斑点叉尾、中华绒螫蟹、泥鳅和锦鲤等水产动物发病,其中对斑点叉尾和泥鳅危害性最大，发病率和死亡率都很高，该菌感染的临床表现为体表多处出血和各内脏出现不同程度出血的败血症症状[7-8]。因为不同菌型的文隆气单胞菌之间存在着流行病学特征、致病性以及地理分布等方面的差异，所以，对于具有潜在致病性的文隆气单胞菌进行分型研究是临床流行病学调查的重要手段[9-10]。