水稻幼苗定植后,待长势稳定,对其进行不同的试验处理,共4个试验处理,每个处理8箱,具体试验处理如下:
W(营养液培育+清水喷施水稻叶片)
MT(营养液培育+200 μM MT喷施水稻叶片)
SW(含75 mM NaCl营养液培育+清水喷施水稻叶片)
SMT(含75 mM NaCl营养液培育+200 μM MT喷施水稻叶片)
1.3 植株形态外观的观察、株高及其生物量测定
试验于处理15 d对水稻株苗进行观察拍照,并用刻度钢尺测量植株株高。然后将水稻株苗从孔穴中取出,先用自来水冲洗,再用蒸馏水将鲜样洗净,用吸水纸吸干表面水分,分为地上部和根部两部分,在105 ℃杀青15 min后于75 ℃烘干至恒重,称得干重(DW)(孙志国等, 2016)。
1.4 植株N、P、K、Mg和Na含量的测定
植株取样清洗之后分为地上部和地下部两部分,105℃杀青15 min后于75℃烘干至恒重,然后粉碎得到待用的干样品。样品消解处理和上机测定方法参考文献(赵海燕等, 2016)。
1.5 植株叶片相对含水量的测定
将水稻幼苗叶片放入去离子水中,快速冲洗后擦干,,称其鲜重Wf,之后把叶片浸入去离子水中达到饱和的状态,即叶片重量不再增加为止,称叶片饱和鲜重Wt,之后把样品放入烘箱内烘干,称它组织干重Wd(陈建勋等,2002)。
叶片相对含水量=(Wf —Wd)/(Wt —Wd)×100%
Wf — 叶片鲜重(g);
Wd — 叶片干重(g);
Wt — 叶片饱和鲜重(g)。
1.6 植株叶片相对电导率的测定
取用大小相同的植物叶片(尽量保证叶片的完整性,少含茎节),利用自来水冲洗干净后再利用去离子水冲洗洗3次,用滤纸吸干表面水分,将叶片剪成适合长度的长条(避开主脉),快速称取鲜样3份,每份0.1 g,分别放到10 ml去离子水的刻度管中盖上玻璃塞放置室温下浸泡12 h,用电导率仪测定浸提液电导(R1),最后沸水加热30 min,冷却至室温后摇匀,再次测定浸提液电导(R2)(陈建勋等,2002)。
相对电导率=R1/R2×100%
1.7 转运系数和离子选择性系数的计算
矿质营养转运系数(Translocation factor, TF)=地上部矿质营养含量/根部矿质营养含量
Na转运系数(Na-TF)=地上部Na含量/根部Na含量
由样品中的K、Na 含量 (mmol g-1 DW),可计算K/Na 比值,按下列公式(马梅等,2015; Fan等,2011)计算离子选择性比率(SK,Na):
SK,Na= (地上部K/Na)/(根部K/Na)
1.8 植株叶片抗氧化酶活力的测定
参考李忠光等[19]文献,将5种抗氧化酶在单一系统中进行提取。首先将水稻株苗叶片剪下,迅速置于液氮中。在事先预冷的研钵中用液氮将水稻叶片充分磨碎,迅速转移到零下80 ℃冷冻储藏待用。然后准确称取0.5 g上述处理的水稻叶片鲜样,加入预冷的提取液2 mL和少许石英砂,进行充分研磨,转入到离心管内,再用3 mL提取液清洗研钵,一起转移到离心管内并置于4 ℃下2000×g离心20 min,分离得到上清液进入酶活测定。
超氧化物歧化酶(SOD)的测定方法:按照Giannopolitis和Ries(1977)与李忠光等(2002)研究相结合的方法,反应混合溶液为50 mmol L-1 Tris-HCl缓冲溶液,pH值为7.8,内含0.1 mmol L -1 EDTA,0.1 mmol L-1 NBT,13.37 mmol L-1蛋氨酸。测定的时候,反应混合溶液和0.1 mmol L-1核黄素溶液(用内含0.1 mmol L-1 EDTA, pH为7.8的50 mmol L-1 Tris-HCl缓冲液配制)首先置于25 ℃水浴中预热。取反应混合溶液2.85 mL(对照还原管为2.90 mL,不加入酶溶液),加入到酶溶液50 μL,再加入核黄素溶液100 μL,最终体积为3 mL。将对照管罩上双层锡箔纸进行遮光,与其他试管于25 ℃下4000 lx日光灯下进行光化还原反应40 min,在无灯光照射的室内快速测定A560。酶活性采用抑制NBT光化学反应50%为一个酶活性单位(U)表示。
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