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摘要：本课题的目的是：利用合成生物学方法，构建2个群体感应质粒，模拟一个二元竞争性合作种群，用于进化生物学研究。使用Aat2与Mlu1对实验室已有的185，186质粒进行双酶切，分别分离纯化含有luxR-lasI和lasR-luxI的大片段；以大肠杆菌MG1655总DNA为模板扩增乳糖通透酶lacY基因片段，连接通用载体pUC-Tm，蓝白斑筛选后取阳性克隆纯化质粒，双酶切后分离纯化lacY小片段，将大小片段连接后转化敲除了lacY基因的大肠杆菌MG1655(ΔlacY)。论文主体工作已经完成。36829
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毕业论文关键词：合作种群；质粒拼接；转化；群体感应
Plasmid construction of competitive cooperation population
Abstract：We make double digestion of target plasmid with Aat2 and Mlu1.Reserve the product of digestion. Then we link these fragments with T4DNAligase.At the same time prepare competent cells from Escherichia coli. Transform target plasmid into Escherichia coli. Find the target colonies and recycle the plasmids. These plasmids are tested by AGE. They shall be reexamined if their sizes after double digestion are fit. Keep the strain and undergo gene sequencing.
Key Words：cooperation population; recombinant plasmid; transform; social evolution theory
目录
1 绪论 - 1 -
1.1 微生物合作关系 - 1 -
1.2 群体感应系统的发现 - 1 -
1.3 基于群体感应的细菌合作与欺骗行为 - 2 -
1.4 争性种群的设计 - 2 -
1.5 pLuxRLasI质粒与pLuxILasR质粒简介 - 2 -
1.6 实验主要内容 - 4 -
2 实验方法与材料设备 - 5 -
2.1 材料与方法 - 5 -
2.1.1 菌种与质粒 - 5 -
2.1.2 实验材料与试剂盒 - 6 -
2.1.3 主要仪器和设备 - 7 -
2.1.4 培养基的制备 - 8 -
2.2 实验方法 - 8 -
2.2.1 细菌基因组DNA的分离纯化（SDS法） - 8 -
2.2.2 琼脂糖凝胶电泳与割胶回收 - 9 -
2.2.3 PCR - 10 -
2.2.4 双酶切与链接 - 10 -
2.2.5 感受态细胞的制备 - 11 -
2.2.6 质粒回收 - 12 -
3 实验方案，结果与讨论。 - 12 -
3.1 实验方案与结果 - 12 -
4 结论与心得 - 18 -
致 谢 - 19 -
参考文献 - 20 -
1绪论
1.1微生物合作关系
微生物群落在自然界中发挥着重要作用，它执行着细菌个体无法完成的任务，例如协调个体代谢，执行连续多步反应等，并且比个体种群更稳定更耐冲击。因此人们观察到微生物表现出来许多群体性社会行为，而这些行为以前被认为只有在复杂的高等生物中才存在，如在包括觅食、扩散等许多生物学活动中表现出多种形式的社会学行为[1]。这些新发现对人们从崭新的角度认识微生物，从而更好地控制或利用微生物将产生深远的影响。
单个的微生物个体是脆弱的，而通过群居生活可以获得3个方面的有益之处：
（1）通过形成群体，微生物才能够有效的抵抗不利于生存的外界环境，包括抗生素和宿主抵抗力的清除作用；
（2）微生物通过群居生活，形成独特的生态环境，从而获得单个的个体难以获得的营养成分；
（3）微生物在生物膜中，个体之间的基因水平传递频率明显增加，通过这种水平传递，微生物获得新的基因和新的生物学特征，从而为更好地适应环境提供新的策略和方法[2]。
这种群居的生活方式意着微生物个体之间存在着广泛的合作和冲突的行为，对这些行为特征的研究以前都集中在哺乳动物、昆虫等多细胞生物上。随着人们从分子和基因水平上对微生物进一步深入研究，一些社会学的概念包括进化理论开始进入微生物学领域。在这样的研究背景下，有人提出了社会学和微生物学的全新的交叉学科———社会细菌学、社会微生物学，该学科研究对象是微生物的群体行为[3]。