盐生草本植物中华补血草(Limonium sinense)主要分布于我国的东北、华北及陕、甘、宁等的盐碱地上,在江苏苏北沿海的连云港、如东、南通等地区的滩涂及盐碱湿地分布广泛。它可改善盐碱地的土壤结构,使盐土脱盐,被誉为盐碱地改造的“先锋植物”[10]。同时全草含多种黄酮体、多糖等有效成份,是目前医学常用中药之一,具有非常重要的实际临床药用价值和应用前景[11]。本实验以从中华补血草叶片中分离出的内生菌KLNMP 5084为对象,回接于盆栽培养的中华补血草幼苗,分别从生长状况、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化物酶(POD)活性、丙二醛(MDA)含量等方面探讨在不同NaCl浓度处理下KLBMP 5084对植株生长的影响,并初步阐释其作用机制。为今后深入开发利用补血草内生菌资源提供科学理论依据,同时为进一步探究中华补血
草对盐渍环境的适应特性,为其在江苏沿海滩涂地区扩大栽培和微生物菌剂研制提供理论依据。
2 材料
2.1供试植物
健康的中华补血草采自江苏省连云港市五七盐场(119°15′ 21.7″E, 34.45′ 08.61″N),样品采集回来后立即进行分离。
2.2 供试菌株
菌株KLBMP 5084 分离自中华补血草植物叶片,保藏于中国药学微生物菌种保藏管理中心(China Pharmaceutical Culture Collection, CPCC),保藏号为CPCC 204179。
2.3培养基
菌株培养培养基:ISP 2培养基:麦芽糖10 g,酵母膏 4 g,葡萄糖 4 g,琼脂 15 g,蒸馏水 1000 mL,pH 7.2;
植物组织培养培养基:MS培养基:NH2NO3 1.65 g,KNO3 1.9 g,KH2PO4 0.1698 g,MgSO4 0.37 g,CaCl2 0.3322 g ,肌醇 0.1 g,铁盐 5 mL,微量元素 1 mL,甘氨酸 1 mL,烟酸 1 mL,VB6 100 μL,VB1 100 μL,蔗糖15 g,琼脂 8 g,蒸馏水 1000 mL,pH 5.8-6.0。
2.4 主要试验仪器
恒温培养箱、烘箱:购自上海精宏实验设备有限公司
高压灭菌锅:SANYO Au toclave MLS-3020型
美国 ABI Beriti 96型;BIOTEK酶标仪
Thermo NANO DROP 2000/2000C分光光度计
电泳仪、凝胶成像仪:购自BIO-RAD
超纯水制备系统RCT-3200A:购自艾科浦公司
分析天平:Sartorius BSA224S Max 220g型
紫外分光光度计:XIN MAO UV-7504型
制冰机SIM-F124:购自日本三洋公司
2.5主要实验试剂
PCR体系:购自生工生物工程(上海)有限公司;
16S rRNA基因扩增所用PCR引物:由生工生物工程(上海)有限公司合成;
植物MDA测试盒,POD测试盒,SOD测试盒,钠测试盒,钾测试盒:均购自南京建成生物工程研究所;
API 50CH 试剂盒、API 20NE试剂盒:由法国BIOMERIEUX公司提供。