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摘要[目的]:研究牛蒡榨菜腌制后期卤水中微生物的组成，了解后期的菌株种类，进一步对其进行分子鉴定，确定其分类学地位，丰富嗜盐菌种类的多样性，为嗜盐菌的鉴定提供方法；对腌制牛蒡的食品安全问题提供保障；测定菌株的最适生长盐浓度，为牛蒡腌制后期控制好菌体数量提供参照。[方法]:对牛蒡榨菜腌制后期卤水水样进行涂布，基于菌落形态进行分离纯化初步获得优势菌群，革兰氏染色确定其阴阳性，基因组DNA的抽提，16S rRNA基因的PCR扩增及序列比对，绘制出系统发育树，测定一步生长曲线确定其对数生长期，用流式细胞仪测定不同盐浓度胁迫下细菌的死活比。[结果]:从腌制牛蒡后期卤水中分离得到一株中度嗜盐细菌，编号为NJ3，测序得到1591bp核苷酸序列，经16S rRNA基因序列比对后发现，NJ3菌株与弯曲假单胞菌（Pseudomonas geniculata）模式菌株的16S rRNA基因序列相似度为99.51%。[结论]:根据两者的亲缘性，可初步判定NJ3属于弯曲假单胞菌（Pseudomonas geniculata），牛蒡榨菜腌制后期卤水中的优势菌株为弯曲假单胞菌（Pseudomonas geniculata）。43419
毕业论文关键词：牛蒡榨菜卤水 中度嗜盐菌 16S rRNA基因 一步生长曲线 流式细胞仪
The Salt-Tolerant Trait of Halophilic Bacteria in the Late Pickled Burdock
Abstract
[Objective] Studying the composition of the brine of pickled burdock is to determine the taxonomic status and to rich the persity of halophilic bacteria category. It can provide the identification methods of halophilic bacteria and offer the guarantee of the pickled food safety. Measure the optimum growth concentration, then control the quantity of the strains. [Methods] Coating and purify the brine of pickled burdock. By gram staining and 16S rRNA gene sequence alignment, draw phylogenetic tree and one-step growth curve. Find out the strains’s optimum growth salinity by using flow cytometer. [Results] Isolate a strain of moderately halophilic bacteria from the brine of pickled burdock, named NJ3, NJ3 strain is similar to Pseudomonas geniculata and the similarity is 99.51%. [Conclusion] According to the sequence similarity, it can preliminarily judge that the dominant strain is Pseudomonas geniculata.
Key words: brine of pickled burdock moderate halophiles 16S rRNA gene sequence one-step growth curve flow cytometer
目录
摘要 I
Abstract II
目录 III
引言 1
1材料与方法 2
1.1材料与试剂 2
1.2仪器与设备 3
1.3培养及鉴定 3
2结果与分析 7
2.1菌株培养 7
2.2形态学观察 7
2.3 16S rRNA基因的PCR产物电泳验证 8
2.4 16S rRNA基因序列比对分析及系统发育树绘制 9
2.5一步生长曲线 10
2.6流式细胞仪检测分析 10
3讨论与展望 12
参考文献 14
致谢 16
引言
牛蒡(Arctium lappa L.)，又名东洋参，为菊科牛蒡属两年生草本植物[1]，其根、茎、果实都可入药，其营养价值和药用保健作用相当高。牛蒡根又名恶实根、鼠粘根，可用于疏风散热、清肠排毒、解毒消肿等[2]，研究发现，牛蒡根对降血脂、抗病毒、抗衰老、降血糖、抗氧化、抗肿瘤、促进血液循环等起重要作用，潜在价值相当高。牛蒡根含有丰富的氨基酸、多糖、挥发油、多酚类、黄酮类、多炔类等物质[3]。牛蒡的成熟果实称为牛蒡子，是一种优良中药。徐州盛产牛蒡，主要用于制作牛蒡茶、牛蒡酒、牛蒡酱、牛蒡酥、牛蒡榨菜等特产，牛蒡作为食补营养品为各家各户所喜爱，有的还会远销国外制成保健品，牛蒡成为重要的出口农产品之一。