银杏叶提取物(GBE)是现代科技所提取出来的最为成功的中药之一。它是以干燥的银杏叶为原料,采用适当的溶剂所提取出来的一种重要的中药材。而且已有研究报道银杏叶提取物是改善老年脑功能的有效制剂。银杏叶中的成分主要包含有黄酮类、內萜酯类等各种成分。 根据近年来国内外对银杏叶提取物的研究表明,银杏叶提取物(GBE)具有很高的医药价值,例如抗肿瘤、调节免疫系统、抗炎、抗氧化等各种药理作用:源^自'751;文,论|文{网[www.751com.cn,同时也有大量研究表明,银杏叶提取物(GBE)除对心血管疾病具有改善作用外,对神经系统也有一定的疗效作用[1]。比如对一些随着一些年龄的增长而造成的认知障碍、记忆障碍、自闭症等等。例如早期的研究表明,在欧洲国家(特别是德国)与美国银杏叶提取物(GBE)就已不断地被用于缓解治疗由于随着年龄的增长而造成的认知障碍所引起的各种症状,例如由年龄增长所引起的失忆状态、血管性痴呆、老年痴呆等等[2-6]临床上焦虑症是一种持续性紧张、过分担心、恐惧或发作性惊恐为一系列特征的情绪障碍性疾病,并伴随有植物神经系统症状、行为逃避、易觉醒和运动不安等行为特征。[7]
本实验采用简便的旷场实验(Open field)来测定银杏叶提取物(GBE)对小鼠学习记忆的改善,通过自主活动计数法来探究GBE对小鼠刻板行为的改善。此实验研究能为以后的神经系统疾病的治疗和医药研究提供一些理论性的基础,而且也能为有关医学方面的临床治疗提供理论性的依据[8]。
1 材料与方法
1.1材料来源
1.1.1 动物
C57BL/6小鼠 14只(雄性),体重25g左右,月龄为7月鼠,由周口师范学院六楼神经生物学与医药转化研究所提供。
1.1.2药物
A 银杏叶片:扬子江药业集团有限公司制药,每片含总黄酮醇苷9.6mg,萜类内酯2.4mg。
B 地西泮片:太原市振兴制药有限公司,规格:2.5mg。
C 无菌水:由周口师范学院二楼重点实验室提供。
D 75 %无水乙醇:由周口师范学院六楼神经生物学与医药转化研究所提供。
1.1.3 仪器
旷场分析仪器:自发活动 Video Tracking for Locomotor Activity 开口的黑色木盒(内部场地大小为81 cm × 81 cm,高28 cm。盒底漆成纵横各3条白线(宽3 mm),从而形成16个等大的方格(每格大小20 cm × 20 cm),计时器,干、湿抹布等。
电子天平:小鼠行为学检测系统,型号:Tru Scan
1.2 药物配制
1.2.1 银杏叶提取物(ginkgo biloba extract,GBE)
第一次在进行实验准备期间我们对小鼠的日饮水量进行了测定,结果显示小鼠的日饮水量为5ml,因此我们配置的GBE浓度为4mg/ml、地西泮为0.083mg/ml。具体操作为取十片银杏叶片剂置入研钵后加吐温80(吐温80为助溶剂),由于银杏叶提取物(GBE)难溶于溶液必须边研磨边加蒸馏水稀释,始终保持终溶液中吐温80浓度小于l%。蒸馏水中加入同比例吐温80,加入无菌蒸馏水配置共200ml溶液:源^自'751;文,论|文{网[www.751com.cn。终溶液为透明澄清液体,肉眼无难容颗粒。因为GBE溶解性差,所以在给药之前充分摇匀,而本实验采用的是口服,因此需要经常性的对其进行摇匀以免较大的实验误差出现。如果药品溶液用完,重复第一次配药过程,提供小鼠的饮用,以利于实验的进行。其中配药方法以上药粉(银杏叶提取物片剂压制成粉)电子天平称取,置入研钵后加吐温80,边研磨边加蒸馏水稀释,保持终溶液中吐温80浓度小于l%。蒸馏水中加入同比例吐温80。吐温80为助容剂,终溶液为透明澄清液体。肉眼无难容颗粒。 银杏叶提取物溶解性稍差,溶解后磁力搅拌为均匀悬浮液,给药前再次混匀,肉眼无见瓶中明显沉淀。