脯氨酸含量(μg/g)=C×V/W 。W:样品重g;C : 标准曲线查出的样品提取液浓度(μg/mL);V:样品提取液体积ml 。
1.3.3叶绿素含量的测定
按照周天等的实验方法[6],稍作修改。取一定数量的新鲜豌豆幼苗的叶片,称重并加入无水乙醇和丙酮各半混合提取液10ml在试管内密封提取液,等到豌豆幼苗的叶片绿色完全褪色后,提取液在分光光度计中测定吸光值,(664.0nm、647.0nm),源^自#751^文/论`文]网[www.751com.cn,按下式计算叶绿索含量:叶绿素的含量(mg/g) = ( 7.9A 664.5 + 17.95A647.0 ) ×10/1000W。式中:A664.5和A647.0分别为两波长下的吸光度,W为样品重。
1.3.4过氧化氢酶活力的测定
测定过氧化氢酶活力的测定参照刘萍等的实验方法[9]。具体方法:准确量取豌豆幼苗的叶片2.5g于研钵中,加4℃预冷的磷酸缓冲液(PH7.8)3mL,并加入少许石英砂研磨,将匀浆转入25mL容量瓶中,用磷酸缓冲液数次冲研钵,定容。摇匀后静置10min在4℃冰箱,取上清液离心15min,离心机设定4000r/min,取10mL的试管3支,一支试管作对照,加0.2mL煮死的粗酶液,另两支试管作处理组,加等量的未煮死的粗酶液,同时在3支试管中加1.5mL磷酸缓冲液(PH7.8)、1.0mLH2O、0.3mL的H2O2,加完立刻计时,快速倒入比色皿中,每隔1min读数1次,共4次,在240nm下测吸光值。
1.3.5可溶性糖含量的测定
测定可溶性糖的含量参考李合生等的实验方法[10]。称取豌豆幼苗0.5g,加液氮和蒸馏水,研磨后并用蒸馏水定容50mL。静止40分钟左右min,用离心机离心20min,转速3500r/min。在试管加样液1mL、蒸馏水9mL。再用试管2支,加1mL稀释样液和5mL蒽酮试剂,摇匀在沸水中10min,冷却,625nm下比色。
C=A×N/W。C:可溶性糖含量(μg/g);W:样品重(g);A:标准曲线查得的可溶性糖(μg);N:提取液/样品反应液。
1.3.6可溶性蛋白质含量的测定
测定可溶性蛋白质的含量参考高俊风等的实验方法[11]。取豌豆幼苗叶片0.2g,加磷酸缓冲液1ml 0.1mol/L,在4℃下研磨,12000r/min离心。取待测液0.1mL和5mL考马斯亮蓝,摇匀静置,用5mL的考马斯亮蓝G-250溶液对照, 595nm比色测定吸光值。
蛋白质的含量=(C×VT)/(VS×WT×1000)。其中C为查标准曲线,μg;VT为提取液总体积,mL;VS为测定时加样量,mL;WT为样品鲜重,mg。
2. 结果与分析
2.1不同浓度BR对豌豆幼苗株高的影响
株高是植物的外部表现,是植物的形态指标。由图1可知,PEG处理的豌豆幼苗的株高低于对照,经过喷施BR的植株在株高形态指标中优于对照, 说明BR对豌豆幼苗生长及抗早性有良好的促进作用。 在从0.05到1mg/L浓度BR处理下,株高先增加后下降,且0.2mg/L 喷施的豌豆植株最高,由此可见,0.2mg/L的BR喷施效果最好。