- 上一篇：HY-16对木质素的降解实验
- 下一篇：里氏木霉内切β-1，4-D-葡聚糖酶II基因的克隆
2.4 、实验方法
2.4.1 、炔螨特降解菌的富集与分离
取1mL炔螨特（农药）于20mL富集培养基中,37℃，170r/min振荡培养6d，再以5mL接种至新鲜富集培养基中，继续培养6d，连续接种5代，然后取1、3、5、6（分别为PPG-1、PPG-2、PPG-3、PPG-4）菌（各200μL）均匀涂布于含炔螨特的固体无机盐培养基中，37℃培养至平板上出现菌落，将菌株转接到LB培养基上，37℃恒温培养，转接到分离纯化培养基中继续摇床培养。实验取PPG-1为实验菌株。
4.2、 菌落形态及菌株显微观察
通过添加炔螨特的LB固体培养基平板观察菌落形态及其透明降解圈，油镜观察降解菌的革兰氏染色玻片。
2.4.3、菌株对炔螨特的降解
取2滴葡萄糖和60微升的农药炔螨特在30mL无机盐培养基中，于37℃，170r/min振荡培养，平均12h取一次样（取5天），测定炔螨特残余量。在待测定的样品中加入等体积（1ml）的二氯甲烷，剧烈振荡2min，进行充分混合（可用离心机），静置分层后将上层水相吸出，在室温下放通风厨内吹干，然后用1ml甲醇（色谱纯）溶解定容后进行HPLC分析。流动相为100%甲醇，检测波长275nm,30℃检测。