油菜叶片4种DNA提取方法的比较研究

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摘要：油菜是我国最主要的油料作物，也是近年来利用分子生物学手段研究的主要经济作物。本研究以普通油菜品种“中双10号”为研究材料，比较油菜叶片四种DNA提取方法（CTAB法，SDSⅠ法（加乙酸钾），SDSⅡ法（加氯仿/异戊醇）和高盐法）的差异。结果表明，4种方法均能提取出纯度较高的DNA，并能通过PCR成功的扩增了油菜内源基因；其中SDSⅠ法的纯净度和提取率比其他3种提取方法略高。65729

毕业论文关键词：油菜叶片，DNA提取，PCR

Abstract：Oilseed rape (Brassica napus L.) is the main oil crops in China, and also the main economic crops that researched by molecular biology in recent years. This research treats the rape of "Zhongshuang No. 10", a kind of the ordinary rape, as materials to compare the differences among these four methods (CTAB and SDSⅠ (plus potassium acetate), SDSⅡ (chloroform/isoamyl alcohol) and high salt method ) of extract the DNA from rape leaf. The results shows that these four methods can all extract the high purity of DNA, and they can amplificate the endogenous genes by PCR amplification successfully. In these methods, the purity and Extraction yield of SDSⅠ is a little higher than other 3 methods.

Keywords：Rape leaf, DNA extraction, PCR

1 前言 - 4 -

1.1 油菜的研究现状 - 4 -

1.2 DNA常用的提取方法 - 5 -

1.3 本研究的目的与意义 - 5 -

2 实验方法 - 5 -

2.1 实验材料 - 6 -

2.2 主要试剂 - 6 -

2.3 实验仪器 - 6 -

2.4 提取液的配置 - 6 -

2.5 提取方法 - 6 -

2.5.1 CTAB法 - 7 -

2.5.2 SDS法 - 7 -

2.5.3 高盐低pH法 - 8 -

2.6 DNA检测 - 8 -

2.6.1 琼脂糖凝胶电泳 - 8 -

2.6.2 普通PCR检测 - 8 -

3 实验结果与分析 - 9 -

3.1 实验结果 - 9 -

3.2 实验分析 - 11 -

4 讨论 - 12 -

小结 - 13 -

参考文献 - 14 -

致谢 - 16 -

1 前言

1.1 油菜的研究现状

油菜是世界重要油料作物[1]，它的生产和消费从2004/2005年度到2013/2014年度10年间均出现大幅度的增长，种植面积由2670万hm2增长至3619万hm2，增长率超过35%；总产由4614万t增长至7120万t，增长了约有54%；菜籽油消费量由1558万t增长至2499万t，增长率超过60%；菜籽粕消费量由2442万t增长至3842万t，增长率大于57%[2]。联合国粮农组织(Food and Agriculture Organization,FAO)有数据表明，作为我国唯一冬季油料作物，近年来我国油菜种植面积超过750万hm2，总产量超过1400万t[3]，这两项均大约占了世界种植面积和总产量的20%。

中国油菜产业的发展迅速，油菜种子含油量大约是33%～50%。自1995年以来，常年种植面积在1亿亩，年产菜籽近1000万吨，占油料作物总产量的40%～45%（不含大豆）；同时还生产约600万吨的菜籽饼粕。饼粕蛋白质含量高达40%，菜籽蛋白质的氨基酸组成合理，其赖氨酸含量和大豆相当，而赖氨酸、蛋氨酸等含硫氨基酸的含量则高于大豆蛋白质，是中国有待开发利用的最大宗优质饲用蛋白源。除了用作榨取食用油和饲料之外，在食品工业中还可制作人造奶油、人造蛋白。还在冶金、机械、橡胶、化工、油漆、纺织、制皂、造纸、皮革和医药等方面均有广泛的用途，具有很好的经济价值。