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摘要: 通过多次试验研究了乳酸克鲁维酵母产β-半乳糖苷酶的摇瓶培养基成分及培养条件，找出了最佳的碳源、氮源、初始PH等。结果表明：在温度30℃，转速150r/min条件下，麦麸为最佳碳源，大豆蛋白为最佳氮源，最佳接种量为4%，最佳初始PH为7，最佳装液量为20ml。此外，添加无机盐也与乳酸克鲁维酵母产β-半乳糖苷酶有关，硫酸亚铁对菌体产酶的促进作用明显优于其他无机盐，而硫酸锌和硫酸锰则对产酶有抑制作用。在最适培养条件下培养48h后，β-半乳糖苷酶活力可达141.4±5.6U/L。经过优化培养条件后，乳酸克鲁维酵母产β-半乳糖苷酶的能力得以提高。65907
毕业论文关键词：乳酸克鲁维酵母；β-半乳糖苷酶；培养条件
Abstact: The best carbon and nitrogen soureces, best initial pH and soon on for Klyveromyces lactis enzyme synthesis were obtioned through several tests of culture conditions of the β-D-galactosidase produced by Klyveromyces lactis.The results of the tests proved that:when the temperature was 30℃, the speed of shake flask rotation is 150 r/min,the best carbon and nitrogen soureces were wheat bran and soya peptone respectively; the best culture conditions were: inoculation size 4% , initial pH 7,liquid volume 20ml, wheat bran addition 4%,soya peptone 4%.In addition,mineral salt is also related with the production of β-D-galactosidase .FeSo4 is superior to the other mineral salt obviously and ZnSo4 and MnSo4 were unuseful to the production of β-D-galactosidase. Under these conditions ,the β-D-galactosidase activity of Klyveromyces lactis could reach 141.4±5.6U/L.By optimizing the culture conditions of Klyveromyces lactis,the production of β-D-galactosidase was improved .
Key words: Klyveromyces lactis; β-D-galactosidase; culture conditions
目录
1 前言 4
2 实验材料与方法 6
2.1菌种 6
2.2培养基 6
2.3主要设备和材料 6
2.4实验方法 7
2.5摇瓶培养基的优化 8
3结果与分析 8
3.1邻硝基苯酚标准曲线的制定 8
3.2培养条件优化 10
结 论 15
参考文献 16
致谢 17
1 前言
β-半乳糖苷酶（β-galactosidase）又称乳糖酶（Lactase），系统名是β-D-半乳糖苷半乳糖水解酶（β-D-galactohydrolase.E.C.3.2.1.23）。β-半乳糖苷酶（β-galactosidase）既具有水解酶类的性质，即可以催化β-半乳糖苷键的水解，。同时又具有转移酶类的性质，即可以转移半乳糖基到乳糖或果糖等受体上[1]。论文网
β-半乳糖苷酶（β-galactosidase）在生产和生活中都具有重大的作用。例如在催化低聚糖合成方面。低聚糖是一种低度聚合糖，由少于十个的单糖通过糖苷键连接而成。由于人体肠胃中的酶系统不能水解它们，所以低聚糖可以不被消化吸收而直接进入大肠内，被双岐杆菌优先利用从而促进双歧杆菌增殖，平衡肠道微生物[2]。乳果糖就是低聚糖的一种。乳果糖具有的生理功能有：促进有益菌增殖，平衡肠道微生物；有利于增强机体免疫作用；作用于营养物质代谢，并对其产生影响；作用于胆汁酸循环；促进血内毒素的降低；促进便秘的防治[3]。因此，乳果糖被广泛的应用于食品工业并且作为药品用于治疗相应疾病。然而化学法合成乳果糖会出现很多难以处理的问题，比如说合成过程中产生的有色副产物不容易分离，分离花费较多等等。而酶法制备乳果糖就不存在这样的问题，这就利用到了β-半乳糖苷酶（β-galactosidase）的转移酶类的性质。可以借助β-半乳糖苷酶（β-galactosidase）的转糖苷活力把半乳糖基转移给果糖受体生成乳果糖。因此研究如何大量生产β-半乳糖苷酶（β-galactosidase）对乳果糖的商业化生产具有积极的促进作用。