十大功劳叶中化合物成分的粗分离(3)

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2.2 实验方法

本实验选用正相硅胶柱色谱法分离。所谓正相色谱是根据流动相和固定相相对极性不同划分的。流动相极性小于固定相极性的情况，称为正相色谱，相反的为反相色谱。正相色谱一般用于分离极性比较小的化合物，对于植物化合物提取分离中大多采用正相色谱。与薄层色谱相比,柱色谱的分离制备量要比前者大得多,即使是在制备型高效液相色谱和逆流色谱出现以后,柱色谱依然是从植物粗提物化合物的最有效的方法之一[8]。硅胶柱色谱操作流程主要有装柱、加样、洗脱三个方面。柱色谱的填料吸附剂有硅胶、纤维素、聚酰胺、交联葡聚糖凝胶、大孔树脂、离子交换树脂等[4]。虽然葡聚糖凝胶、大孔树脂以及离子交换树脂分离效果比较好，但是由于本次实验目的是对十大功劳叶中间物质的粗提取与分离，因此可以先选用硅胶作为固定相进行分离，且价格便宜。

2.2.1 装柱

将吸附剂（硅胶）与流动相（二氯甲烷）混合，搅拌以除去空气泡，慢慢倒入色谱管中，然后加入流动相，将附着于管壁的吸附剂冲下，使色谱柱表面平整。最后，用流动相对色谱柱进行冲洗，直到色谱柱中无气泡，并且固定相调料均匀，表面平整。当流动相液面与柱顶端硅胶面相平时，开始加样。来~自^751论+文.网www.751com.cn/

本实验中柱色谱选用的是加压柱。加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使洗脱剂洗脱的快些。压力的提供可以是压缩空气。特别是在容易分解的样品的分离中适用。压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。

2.2.2 加样

将样品溶于洗脱时使用的流动相中，混合均匀之后沿色谱管壁缓缓加入。注意勿使吸附剂翻起。可以与少量吸附剂混匀，等溶剂挥发之后样品呈松散状时，将混有样品的吸附剂加入色谱柱上面。如果样品不溶解，可将样品与适量的吸附剂在研钵中研磨混匀后再加入。

2.2.3 洗脱

流动相采用二氯甲烷和甲醇进行梯度洗脱，比例依次选用100%二氯甲烷、1%甲醇、3%甲醇、5%甲醇、6%甲醇、8%甲醇、10%甲醇、20%甲醇。当洗脱剂比例为10%甲醇时，洗脱出的物质颜色已经较浅，表明此时物质几乎已经洗脱完毕，改换20%甲醇将剩余物质洗出，直到洗脱出的液体无色，认为目的化合物被全部洗出