2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 菌株
所用菌种为由本实验室保藏的外切葡聚糖酶重组马克斯克鲁维酵母
2.1.2 主要仪器及设备
250mL锥形瓶、试管、橡皮管、橡皮塞、酒精灯、管子、比色皿
2S-75HJ型高压灭菌锅:江阴滨江医疗设备有限公司
高速冷冻离心机HR21M:湖南赫西仪器设备有限公司
HD-930型组合式全温摇床:太仓市博莱特实验仪器厂
SW-CJ-IFD型单人单面净化工作台:苏州净化设备有限公司
HD-930DHG-9240A型电热恒温鼓风干燥箱:上海精宏实验设备有限公司
电子天平BS210S:北京赛多利斯天平有限公司
ZF1-I多功能紫外分析仪:上海汗诺仪器有限公司
HH-S恒温水浴锅:金坛市亿通电子有限公司
FM-50型雪花制冰机:上海比郎仪器有限公司
EPED-E2-10TF纯水仪:南京易普易达科技发展有限公司
2.2 主要试剂
1、DNS:19.8g氢氧化钠和3,5-二硝基水杨酸溶于1416mLddH2O溶液,等充分溶解后再加入306g酒石酸钾钠、7.6mL苯酚(50℃熔化)、8.3g偏重亚硫酸钠,避光保存。
2、5mmol/L 乙酰胺:称量2.95g 乙酰胺溶于10mL的ddH2O中,过滤除菌,分装在1.5mL的EP管中。-20℃冻存备用。
3、柠檬酸缓冲液(50mM,pH4.0):A溶液:1.0505g柠檬酸溶于50mLddH2O。B溶液:1.4705g柠檬酸钠溶于50mLddH2O。32.75mL A溶液与17.25mL B溶液混匀,再加入50mLddH2O。
4、0.1M PBS(pH=6.0):13.682.0g NaH2PO4溶于1LddH2O,充分溶解后再加入4.405g Na2HPO4充分溶解。来`自^751论*文-网www.751com.cn
5、50 mL发酵培养基:A溶液:0.1gYNB溶于24 mL PBS(pH:6.0)。B溶液:0.5g葡萄糖溶于25mL PBS(pH:6.0)。将A溶液和B溶液分别在121℃灭菌20分钟,冷却后将A溶液和B溶液混合,再加入1 mL乙酰胺。
6、2% CMC( w/v)溶液:称量2g CMC-Na加入80mL柠檬酸缓冲液(50mM,pH4.0),50℃边水浴边搅拌溶解,完全溶解后定容至100mL,储存于冰箱中备用。
7、玉米秸秆处理[13]:称量10g氢氧化钠充分溶解于1LddH2O中,继续加入200g玉米秸秆粉,搅拌均匀, 121℃灭菌20分钟。将煮沸过的玉米秸秆倒入纱布,用清水反复清洗,直至氢氧化钠被清洗干净,最后用蒸馏水清洗一遍,把水分拧干,储存于冰箱中备用。