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    原液A:称取NaCl 16.0 g、KCl 8.0 g、MgSO4•7H2O 2.0 g、MgCl2•6H2O 2.0 g、CaCl2(无水)2.8 g,溶于双蒸水至1000 ml,滤纸过滤,储存于4.0 ℃;
    原液B:葡萄糖20.0 g、Na2HPO4•12H2O 0.06 g、KH2PO4 1.2 g、双蒸水800.0 ml,用滤纸过滤,加入0.5 % 酚红80.0 ml,加水至1000.0 ml,储存于4.0 ℃。
    Hanks液:A、B液各1 份,双蒸水18 份,用5.6% NaHCO3调节pH 至7.4。
    1.2.4 不同浓度的PEG溶液(m/V)的配制[3]
    (1) 分别称取PEG 6 g置于4个小烧杯中,然后放入恒温水浴锅中水浴加热,使其融化。
    (2) 让PEG缓慢冷却到50~60 ℃,注意不要使PEG凝固。
    (3) 向4个小烧杯中分别加入预热至50 ℃的GKN液混匀,配制成10%、30%、50%、70%的PEG溶液。
    1.2.5 鸡血细胞悬液的配制[3]
    (1) 家鸡的翼根静脉采血后制备抗凝全血。用注射器在鸡翼下静脉采血,注入试管后,迅速加入肝素(100 U肝素/5 ml全血),混合均匀,制成抗凝全血。
    (2) 向抗凝全血的试管中加入4倍体积的0.85%的生理盐水溶液。混合均匀,制成红细胞贮备液,4 ℃ 冰箱保存。
    (3) 取1 ml的鸡血细胞贮备液于刻度离心管中,加入4 ml 0.85%的生理盐水,混合均匀,放入低速离心机中,1000 r/min条件下离心5 min,弃上清。按上述条件再离心一次。
    (4)将沉淀物配制成悬浮液。并采用血球板计数法将悬浮液分别稀释成细胞密度为1×106 个/ml、1×107 个/ml、1 ×108 个/ml的悬液。
    1.2.6 细胞融合实验方法[4-5]
    (1)不同条件下细胞融合方法
    ①不同鸡血细胞悬液浓度下细胞融合方法
    分别取1 ml 细胞密度为1×106 个/ml、1×107 个/ml、1 ×108 个/ml的鸡血细胞悬浮液(其中含有的CaCl2 浓度为12.6 mmol/l)到3支刻度离心管,分别加入4 ml Hanks液后混匀,1000 r/min条件下离心5 min,弃上清,为使沉淀的血细胞团块松散,然后用手指多次轻弹离心管底部。向3支刻度离心管中分别加入0.5 ml浓度为50%的PEG溶液(预热至37 ℃),要沿管壁缓慢加入,边加边摇匀,加入后在37 ℃水浴锅中静置10 min。
    ②不同PEG浓度下细胞融合方法
    按照①的操作方法进行,其中1 ml 鸡血细胞悬浮液的细胞密度固定为1×107个/ml,加入浓度分别为10%、30%、50%、70%的PEG溶液。
    ③不同PEG作用时间下细胞融合方法
    按照②的操作方法进行,其中PEG溶液的浓度固定为50%,加入PEG溶液后静置时间分别为2 min、5 min、10 min、20 min。
    ④不同鸡血细胞悬液放置时间下细胞融合方法
    按照③的操作方法进行,其中加入PEG溶液后静置时间10 min,1 ml鸡血细胞悬浮液分别放置5 min、10 min、15 min后再加入到离心管中。
    ⑤不同钙离子浓度下细胞融合方法
    按照①的操作方法进行,其中1 ml细胞密度为1×107 个/ml的鸡血细胞悬浮液中含有的钙离子浓度分别为0、12.6、50.0、75.0、100 mmol/ml。
    (2) 终止PEG作用及染色观察
    ①向各离心管中缓慢加入5 ml Hanks液,然后轻轻吹打混匀,在37 ℃水浴锅中静置5 min,终止PEG作用。
    ②为使细胞团分散,多次用吸管轻轻吹打细胞团,1000 r/min条件下离心5 min,使细胞完全沉降。弃上清。然后按上述条件,再次离心,弃上清,加入少许Hanks液,混匀。
    ③在上述各离心管中加入Janus green B 染液,用牙签搅匀,染色3 min。分别用不同的吸管吸取各刻度离心管中溶液制成装片,在显微镜下观察细胞融合情况。
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