(6) 微波辅助萃取法
是一种利用分子共振原理的萃取技术。通过微波产热,使脂肪细胞内的温度迅速上升,破坏 细胞壁促进脂肪溶出。具有快速、穿透力强、加热效率高、能 耗小、溶剂用量小等特点,有利于极性和热不稳定的化合物的萃取,避免了高温所引起的热分解,适用于同时处理多个样品。微波萃取法结果的重现性更好,标准偏差明显低于索氏抽提法。彭丹等[12]进行了微波辅助提取西瓜子油工艺的研究, 试验得出西瓜子油的最优工艺条件:以石油醚为提取溶剂、料液比 1∶20(g/mL)、微波功率390 W、微波时间15 min、不浸泡,在此条件下西瓜子油的提取率可达到40.00%。
1.1.4 常见的蛋白质提取技术
(1)碱溶酸沉法
利用蛋白质可溶于稀碱溶液,但当PH值达到等电点时蛋白质又会析出的原理,先用一定浓度碱性溶液来溶解蛋白质,然后分离出澄清溶液,再利用一定浓度的酸性溶液调节pH值到等电点附近使蛋白质析出,接下来把沉淀中的蛋白质分离出来。碱溶酸沉法是目前炒作最成熟、应用最多的蛋白质提取方法,常用的碱液是氢氧化钠溶液。碱溶酸沉的优点是操作简易于控制、成本低廉。缺点是提取操作时间长,蛋白质提取率低,易导致蛋白质变性,对某些原料提取出的蛋白质色泽深等[13]。
(2)盐溶酸沉法
蛋白质不仅可以溶于稀碱溶液,还能溶于低浓度的盐溶液,通过调整溶液的pH到等电点也可以使蛋白质析出,从而提取分离蛋白质。低浓度的盐有利于蛋白质的溶解,但高浓度的盐会使蛋白质出现盐析现象,因此盐的浓度要特别注意。常用的盐溶液是氯化钠溶液和六偏磷酸钠溶液,和传统的碱溶酸沉法相比,盐溶酸沉法的蛋白质提取率较高,蛋白质变性差,但纯度低。
(3)水酶法
该方法适用于提取油脂含量较高的植物蛋白,在获得高品质油脂的同时得到高质量的蛋白质。水酶法以机械和酶解为手段,来降解细胞壁,分离出蛋白质。水酶法的特点是可同时提取油脂和蛋白质,反应条件温和,蛋白质不易变性;提取率高;缺点是酶的成本高,用量大。水酶法操作的关键是酶的选择,根据原料细胞结构和化学成分选取恰当的酶,才能保证提取的高效率。邹华蓉等[14]采用水酶法,利用纤维素酶作为催化剂解脱酚棉籽,得到的最佳酶解工艺条件是料液比1:10,浸提时间3h,浸提温度55℃,加酶量5‰。此条件下,棉籽毛油得率为64.53%,水溶液中棉籽蛋白质的含量为78.30%。朱俊等[15]利用水酶法提取冷榨菜籽饼中蛋白质和油脂的研究结果表明:pH 11,温度60℃,固液比1:15,浸提30min为最佳工艺条件,此时蛋白质提取率为87.69%。源-自/751+文,论^文'网]www.751com.cn
(4)膜分离法
利用超滤膜等有选择性能的特殊膜能够截留蛋白质、胶体等大分子颗粒,使溶剂和小分子物质通过的性质,对于易于溶于水、稀酸、稀碱的蛋白质,可以采用膜分离的方法进行提取。膜分离是浓缩和提纯所有已溶解蛋白质的简便方法,分离所需时间短,蛋白质提取率高、质量好,提取过程能耗少、污染少等优点,缺点是膜易受污染,膜的成本高。邹华蓉等[14]分别用超滤膜和纳滤膜进行了蛋白质的分离,由于纳滤膜孔径小,经常出现浓差极化的现象,而超滤膜能让孔径小于1000道尔顿的物质通过,截留蛋白质,效果较好。
(5)有机溶剂法
有些蛋白质,由于分子中有较多的非极性侧链,或者与脂类物质结合的比较牢固,它们不溶于水、稀盐、稀酸或稀碱溶液中,可选择有机溶剂提取法来提取蛋白质。用乙醇、丙酮和丁酮等同时具有亲水性和亲油性的溶剂做蛋白质提取液,在低温下进行蛋白质提取。丁醇提取法对提取一些与脂类结合紧密的蛋白质特别有效,原因是丁醇亲脂性强同时兼具亲水性,尤其是溶解磷脂的能力强,在溶解度范围内不会引起蛋白质变性。有机溶剂提取蛋白质必须在低温下操作,温度控制不好易导致蛋白质变性。有机溶剂法亦可用于蛋白质纯化过程。