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2.4.4 最小定量限 24
2.4.5 最小检出限 24
2.4.6 准确度 24
3实验结果 27
3.1 有关物质测定方法学验证 27
3.2 原料杂质限度制定依据 28
3.3 有关物质检测方法及质量标准 28
4论文总结 30
致谢 31
参考文献 32
附录 34
1 前言
1.1 药物研究背景
1847年，白血病初次被德国的病理学家鲁道夫•魏尔啸(Rudolf Virchow )发现，细胞组织内脱氧核糖核酸DNA的突变从而形成骨髓中制血系统的异常运作是其主要病源。干细胞在骨髓中一天能够产生红细胞及白细胞近10万(Stem Cell)。由于白血病患者持续繁殖非正常的白细胞，以致于骨髓在生产别的血细胞时效能下降，影响了骨髓的运作，因而白血病能够分散至中枢神经系统、脾、肝、淋巴结。
白血病是一种制血细胞大量自我复制性的恶性病，又称克隆性白血病。克隆性白血病因为正常细胞停止繁殖增加、分解障碍、凋亡受阻而非正常细胞在其他造血组织和骨髓中持续繁殖增加，并分散到其他器官和组织，而正常造血系统遭到抑止。在临床医学上可呈现出非正常出血、易感染，不同阶段的脾、肝、淋巴结肿大和骨骼疼痛等症状。据调查，中国的白血病发病率较高，按照死亡率排列，男性白血病在恶性肿瘤中占第751位，而女性则占第八位，在小孩及40岁以下成年人中则位居第一。位于第22号DNA染色体上的断点簇集区域(bcr)与第9号DNA染色体上的癌基因c-abl相连接，构成2种Bcr-abl融合基因p210与p185，此2种融合基因诱发Bcr-abl酪氨酸激酶不断复活，从而导致细胞的繁衍增加、吸附以及生长性质的改变，分别导致形成慢性粒细胞白血病和急性粒细胞白血病[1]。Bcr-abl基因是CML的病源毫无疑问，因此其在人体慢性白血病中的作用尽显无疑，几乎96%的白血病病患Bcr-abl阳性。现在，Bcr-abl融合基因既是检测慢性粒细胞白血病的标准,其程度的变化亦是判别病情和效果的唯一准则。
Bcr-abl融合基因是由位于第22号DNA染色体上的断点簇集区域(bcr)与第9号DNA染色体上的癌基因c-abl相连接交换位置所诱发的，核型为t(9；22)(q34；q11)[2]。含有该核型的染色体为Ph染色体。Bcr-abl融合基因的编码产物为Bcr-abl融合蛋白。按照Bcr断裂部位的差异，Bcr-abl分别有3种：(minor) m 型、M 型(Major) M 型和(micro) μ型。此三类Bcr-abl所产生的蛋白形成物分别是P190、p210和p230，当中前面二者是主要的，而p230很少生成，并且pl90在急性粒细胞白血病被发现， p210则在慢性粒细胞白血病生成（>96%)[3]。
1.2 药物发展历史
曾经的20多年里，科研工作者察觉Bcr-abl激酶在细胞信号的传导和转变中起着主导的作用，其经过磷酸化和活化等一系列下游底物，使慢性粒细胞白血病中的成熟粒细胞无限增生。Bcr-abl不出现在健康细胞，所以它是医治白血病理想的分子靶点。1998年，药物工作者指望从核糖核酸RNA方向抑止Bcr-abl融合基因产生效果，但没能有效治疗白血病。随着融合基因的结构和表达产物的说明，针对Bcr-abl蛋白小分子的药物研究及研发引起了研究人员的关注。当前几年，研制的有关Bcr-abl激酶抑制剂对慢性粒细胞白血病的疗效显著。
20世纪90年代早期，在药物研究人员的率领下，研制了一些小分子的化合物，它们都基本以2-苯氨基嘧啶为主。对比后，察觉伊马替尼(Imatinib)可额外抑止Bcr-abl酪氨酸激酶的活性[4]。在2001年5月，美国FDA准许诺华公司的Imatinib用于医治白血病，这是首个医治白血病的Bcr-abl酪氨酸激酶抑制剂，因此具有跨时代的非凡意义，还被《科学》报刊列入了2001年度十大科技新闻之一[5]。伊马替尼是第一个医治抗肿瘤的分子靶点药物。如今已确定，Imatinib并不是唯一特异的酪氨酸抑制剂，它除了抑制Bcr-abl酪氨酸激酶活力外，还对血小板衍生因子β受体酪氨酸激酶和干细胞因子c-kit配体酪氨酸激酶的活力也有相同程度的抑制[6]。但是，在之后的医学探索中，Bcr-abl基因出现了十几种不同的突变，最终促使Imatinib产生了耐药性[7]。如今，使用伊马替尼治疗半年约有3％～18％的患者产生耐药，使用一年约有15％～27％ 的患者耐药，使用l8个月约有23％～49％患者耐药[8,9]。因为突变的形成，研究人员急需研发第二代Bcr-abl酪氨酸激酶抑制剂。