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    表3 12% SDS-PAGE分离胶
    试剂名称    H2O    30%Acrylamide    Tris-HCl
    (pH=8.8)    10%SDS    10% APS    TEMED
    用量    3.3 mL    4.0 mL    2.5 mL    100 μL    100 μL    4.0 μL
    按顺序添加试剂,每加一种试剂就立即充分混匀,混匀后,尽快灌胶,避免局部或整体凝固。
    表  4 5% SDS-PAGE浓缩胶
    试剂名称    H2O    40%Acrylamide    Tris-HCl
    (pH=8.8)    10%SDS    10% APS    TEMED
    用量    2.4 mL    0.5 mL    1.0 mL    40 μL    40 μL    4.0 μL
    待下层分离胶配好,凝固30 min-1h后配制浓缩胶
    表5  SDS-PAGE电泳缓冲液
    .试剂名称    甘氨酸    Tris-Base    SDS
    用量    18.4g    3.0g    1.0g
    去离子水搅拌溶解定容至1L,常温放置备用,现配现用。转膜缓冲液,在电泳缓冲液的基础上加入20%的无水乙醇即可,转膜缓冲液现配现用。
    表6 考马斯亮蓝染色液
    试剂名称    考马斯亮蓝R-250    甲醇醇    冰醋酸    ddH2O
    用量    2.5g    400 mL    100 mL    500 mL

    考马斯亮蓝染色液按上表格配置充分溶解好常温放置备用,染色液可反复使用,考马斯染色液毒性较大,且挥发性较强,需在通风橱或密闭容器中进行染色。
    表7 考马斯亮蓝脱色液
    试剂名称    甲醇    冰醋醇    ddH2O
    用量    400 mL    100 mL    500 mL
    考马斯脱色液按上表格配置并充分混匀常温放置备用,由于很容易挥发,且极其刺鼻,需在通风橱中操作,或在密闭容器中保存及进行脱色实验。
    1.1.5  蛋白质纯化试剂
    上清洗脱缓冲液;包涵体洗脱缓冲;上清溶解缓冲液;包涵体溶解缓冲液;IPTG; PBS;部分试剂具体配制方法列于下方表8、9。
    表8 异丙基硫代半乳糖苷 ( IPTG )
    试剂名称    IPTG    ddH2O
    用量    1.2g    40 mL

    按上述表格预先配置好IPTG母液,再用0.22 μm进口滤器在无菌环境下过滤,母液冻存在-40℃冰箱备用,使用时按照对应比例稀释使用。
    表9.碱性磷酸盐(PBS)
    试剂名称    NaCl    KCl     Na2HPO4    KH2PO4
    用量     8g    0.2g    1.44g    0.20g
    蒸馏水溶解定容至1L,洗膜专用PBS(PBST)添加1/1000 吐温20,混匀备用;重悬菌体专用PBS采用去离子水溶解定容并高压灭菌备用,无需加吐温20。
    1.1.6  Western-blot试剂及抗体
    转膜Buffer;TBST;PVDF膜;封闭液为TBST配制的5%脱脂奶粉;增强型HRP-PAB底物显色试剂盒。一抗为高免兔血清(封闭液稀释比例为1:2000),二抗为羊抗兔IgG(封闭液稀释比例为1:10000)。部分试剂具体配制方法列于下方表。

    表10  转膜Buffer
    试剂名称    Gly    Tris    SDS    甲醇
    用量    2.9g    5.8g    0.37g    200ml
    去离子水定容至1L。
    表11  TBS
    试剂名称    Nacl     1M Tris-HCl(pH8.0)    Tween
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