猪链球菌菌蜕疫苗的制备研究

摘要：细菌菌蜕作为新型疫苗不仅可以诱导机体产生强烈的免疫应答，而且与其他传统灭活苗相比，更具有安全性。本研究探索用氢氧化钠制备猪链球菌 2 型菌蜕和猪链球菌 9 型菌蜕，免疫 BALB/c小鼠后攻毒评价菌蜕免疫效果。氢氧化钠对猪链球菌 2型和 9型最小抑菌浓度均为 6mg/mL，用该浓度氢氧化钠诱导菌蜕形成，扫描电镜观察显示可见清晰的溶菌孔道。为评价两种菌蜕疫苗免疫效果，将 60 只小鼠随机分成五组：A 组（未免疫的对照组），B 组（背部皮下注射 SS2 灭活苗），C 组（背部皮下注射 SS9 灭活苗）D 组（背部皮下注射 SS2 菌蜕疫苗），E 组（背部皮下注射 SS9 菌蜕疫苗）。利用酶联免疫吸附试验检测五组 BALB/c 小鼠首次免疫后第 7 天，第 14 天，第 21天，第 28天的抗体水平，结果表明 SS2菌蜕疫苗免疫组和 SS9菌蜕疫苗免疫组小鼠抗体水平明显高于未免疫对照组，SS2 和 SS9 攻毒结果表示菌蜕疫苗免疫组的小鼠存活率也高于未免疫对照组。猪链球菌 2 型菌蜕疫苗和 9 型菌蜕疫苗能够对 BALB/c 小鼠提供一定的免疫保护，为猪链球菌病的防控提供新的思路。37259
毕业论文关键词：猪链球菌 2 型；猪链球菌 9 型；菌蜕；免疫保护
Effect of ion detergent on membrane perforation of Streptococcus suis
Abstract: As a new vaccine, bacterial ghost (BG) can induce a strong immune response, and it is safer thantraditional vaccines. In this study, the non-living SS BG was generated by using the minimum inhibitoryconcentration of sodium hydroxide (6mg/mL), and its protective efficacy was evaluated in mice. Scanningelectron microscope displayed that some bacteria have clearly lytic channels. To investigate the SS BG as avaccine candidate, the 50 BALB/c mice were randomly pided into three groups: Group A(non-immunized control group), group B (subcutaneous injection of inactivated SS2), group C(subcutaneous injection of inactivated SS9), group D (subcutaneous injection of SS2 BG), group E(subcutaneous injection of SS9 BG). Serum were collected from five groups on the day of 7, 14, 21 and 28after the first immunization. The results showed that the antibody level of mice from group ss2 BG andgroup ss9 BG were significantly higher than group A, and the survival rate of group (ss2 and ss9) washigher than that in group A. These results suggest that immunization with SS BG induces immuneresponses and provides protection against virulent SS challenge, which contributes to vaccine developmentagainst SS infection.
Key words: Streptococcus suis serotype 2; Streptococcus suis serotype 9; Bacterial ghosts; Protectiveimmunity
目录
摘要.1
关键词.1
Abstract.1
Keywords.1
引言.1
1材料与方法.2
1.1试剂及仪器.2
1.2菌株与实验动物.3
1.3方法3
1.3.1SS2和SS9的生长曲线3
1.3.2MIC的判定3
1.3.3SS2菌蜕和SS9菌蜕的制备3
1.3.4SS2菌蜕和SS9菌蜕生长观察3
1.3.5SS2菌蜕和SS9菌蜕琼脂凝胶电泳检测3
1.3.6SS2菌蜕和SS9菌蜕表面结构的观察3
1.3.7动物实验.3
2结果与分析.4
2.1SS2和SS9的生长曲线4
2.2MIC的判定5
2.3SS2菌蜕和SS9菌蜕生长观察6
2.4SS2菌蜕和SS9菌蜕琼脂凝胶电泳检测6
2.5SS2菌蜕表面结构的观察6
2.6SS2和SS9免疫保护效果评价7
2.6.1血清中抗体水平测定7
2.6.2免疫与攻毒试验2
3讨论.2
致谢.3
参考文献.3
引言：猪链球菌(Streptococcus suis)属于链球菌属，革兰染色呈阳性，是引起猪链球菌病的主要病原，也是一种重要的人畜共患病原菌。不仅引起猪的脑膜炎、败血症、关节炎、肺炎及急性死亡；也可感染人，引起脑膜炎、中毒休克综合征及死亡。根据荚膜多糖抗原性的差异，猪链球菌分为 33 个血清型，其中 2 型 (SS2) 最为常见、毒力最强、危害最严重[1]。对猪不分年龄，品种和性别均易感，但大多数在 3-12 周龄的仔猪暴发流行，尤其在断奶及混群时易出现发病高峰。其传播方式主要通过口或呼吸道传播，也可垂直传播。猪链球菌自然存在于猪的上呼吸道，尤其是扁桃体和鼻腔中，而且可以在健康猪和病猪的腭扁桃体定居一年。从健康猪的上呼吸道、鼻腔和聘扁桃体均可分离到SS，亚临床症状的带菌猪是主要的感染源。猪链球菌病通过破损皮肤如伤口或擦伤传染给人，也可通过呼吸道传染给人，鼻咽部的损伤可能也是传播途径。除了 SS2 外，现已发现猪链球菌 9 型（SS9）能够感染人并导致细菌血症[2]。我国猪链球菌的流行病学调查发现 SS9 血清型的分离率升高，逐渐和欧洲国家以 SS9 为主要分离株趋势同步，并且猪链球菌临床分离株的致病力出现了逐渐增强的趋势[3,4]。猪链球菌不仅对养猪业造成重大经济损失，也给公共卫生和食品安全带来严重威胁[5]。分子流行病学研究表明,高致病性猪链球菌 2 型含有溶菌酶释放蛋白，胞外蛋白因子，溶血素等毒力因子，其致病性与这些毒力蛋白的合成及其相互作用有关，也可能与该细菌中存在致病性的毒力岛有关。细菌菌蜕（bacterial ghosts, BGs）一般是指革兰阴性细菌被裂解基因 E 裂解后形成的完整细菌空壳。通过此种基因灭活的手段，其内外膜结构保持良好，不会引起细菌表面结构的任何物理化学变化。细菌菌蜕不仅文持了细胞的基本形态，而且完整地保留了细胞表面的抗原结构，可诱导机体的免疫应答。故细菌菌蜕在疫苗生产中具有很大的潜力[6]。目前已有学者研究并成功研制了大肠杆菌菌蜕 [7]，爱德华氏菌菌蜕疫苗 [8,9]，嗜水气单胞菌菌蜕 [10]，幽门螺杆菌菌蜕疫苗 [11]等一些革兰阴性菌。细菌菌蜕不具有生物活性，内部 DNA 被消耗仅存外壳，但是却能诱导强烈的免疫反应来抵抗特异性感染。故理论上，菌蜕疫苗比传统的变性灭活疫苗（如甲醛灭活苗）具有更好的免疫保护效果，能诱导更强的免疫反应，是一种比常规疫苗更理想的新的疫苗体系[12]。虽然裂解 E 基因能诱导产生菌蜕疫苗，且可达到较高的裂解率，但不适用于革兰阳性菌。近来，有研究证明利用氢氧化钠（NaOH）诱导菌蜕，并在革兰阳性菌如金黄色葡萄球菌和革兰阴性菌如肠炎沙门菌中取得了一定的成果[13,14]。目前，国内针对猪链球菌病的防治主要采取疫苗免疫接种和药物防治，长期使用某些抗生素使细菌产生耐药性，同时在畜体内产生残留。研制安全、有效的疫苗是防控猪链球菌病的关键。猪链球菌灭活菌苗、亚单位苗、基因工程活载体疫苗等相关研究有很多[15]，但疫苗免疫效果还有待进一步提升，因此，研制出安全高效的猪链球菌疫苗就显得尤为重要。本研究应用 NaOH 的最小抑菌浓度（MIC）制备了 SS2 菌蜕疫苗和 SS9菌蜕疫苗，能够诱导 BALB/c 小鼠产生抗体增强，为猪链球菌疫苗研制提供新的参考。猪链球菌菌蜕疫苗的制备研究:http://www.751com.cn/yixue/lunwen_35985.html