3.2.6 精密度
在最佳显色条件下,配100mmol/L底物酸的磷酸缓冲溶液10mL,用0.1mol/L磷酸盐溶解。稀释至30,50,100mmol/L用双蒸水。
体系1:50mmol/L 转化液1mL和30mmol/L标酸1mL
体系2:50mmol/L 转化液1mL和0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液1mL
体系1:50mmol/L 转化液1mL和50mmol/L标酸1mL
体系2:50mmol/L转化液1mL和0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液1mL
体系1:50mmol/L转化液1mL和100mmol/L标酸1mL
体系2:50mmol/L 转化液1mL和0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液1mL
同样处理都稀释25倍
空白1:不加酸的水溶液
空白2:不加腈的转化液
取1mL上述混均液于体系中,依次加入4mmol/L盐酸羟胺的乙醇溶液 3mL,0.2mol/L DCC的乙醇溶液200μL于体系中,充分混匀后在60℃水浴锅内水浴15min,15min后取出全部离心管,冷却至室温(室温放置约10min),最后分别向离心管中加入0.5mol/L氯化铁的乙醇溶液50μL,混匀,在室温下反应10min,于500nm波长处测定吸光度值。6个样品同样操作。
3.2.7 腈水解酶活性的测定
空白1:不加酸的水溶液
在最佳显色条件下,取不加酸水溶液的稀释液1mL,依次加入4mmol/L盐酸羟胺的乙醇溶液 3mL,0.2mol/L DCC的乙醇溶液200μL于体系中,充分混匀后在60℃水浴锅内水浴15min,15min后取出全部离心管,冷却至室温(室温放置约10min),最后分别向离心管中加入0.5mol/L氯化铁的乙醇溶液50μL,混匀,在室温下反应10min,于500nm波长处测定吸光度值。
空白2:不加腈的转化液
在最佳显色条件下,取转化液的稀释液1mL,依次加入4mmol/L盐酸羟胺的乙醇溶液 3mL,0.2mol/L DCC的乙醇溶液200μL于体系中,充分混匀后在60℃水浴锅内水浴15min,15min后取出全部离心管,冷却至室温(室温放置约10min),最后分别向离心管中加入0.5mol/L氯化铁的乙醇溶液50μL,混匀,在室温下反应10min,于500nm波长处测定吸光度值。
样品:取50mmol/L,100mmol/L的加腈转化液100μL,加2900μL的双蒸水(稀释30倍)。
在最佳显色条件下,取转化液的稀释液1mL,依次加入4mmol/L盐酸羟胺的乙醇溶液 3mL,0.2mol/L DCC的乙醇溶液200μL于体系中,充分混匀后在60℃水浴锅内水浴15min,15min后取出全部离心管,冷却至室温(室温放置约10min),最后分别向离心管中加入0.5mol/L氯化铁的乙醇溶液50μL,混匀,在室温下反应10min,于500nm波长处测定吸光度值。 快速测定水解酶活性的新方法研究(9):http://www.751com.cn/yixue/lunwen_6417.html