of Research Bioresources JCRB, Tokyo, Japan)。
2.3 划痕实验
取对数生长期的Huh-7细胞铺满6孔培养板,然后置于37 oC、5% CO2培养箱常规培养。当细胞浓度超过90%时,将含血清培养基撤去,更换为无血清的培养基进行培养12 h。采用200 µL移液枪头在培养孔中央进行划痕,使之形成的伤口宽度均一,随后用PBS洗去脱落的细胞。然后加入20 µmol·L-1的木犀草苷,同时以不含药物的小组作为对照组,分别在损伤后的0 h、48 h,在显微镜10倍下进行观察,并拍照记录损伤区域处的细胞运动情况。
2.4 Transwell实验
先把小室擦干净后在超净工作台照紫外过夜,将小室倒扣并在小室的底部外侧滴加1%的明胶室温放置20-30 min,调整细胞浓度至5×105 ml-1。拿出24孔板加800 ml含有刺激因子的培养基,37 oC培养。将小室上还未干的明胶甩掉,加细胞放入24孔板里。放入细胞培养箱培养4-6小室。拿出小室甩掉里边的培养基。小心擦尽小室里边的细胞(不能碰外边)。将小室放入装有结晶紫的24孔板染色1 h,最后移到空的24孔板,此时在显微镜下观察。来!自~751论-文|网www.751com.cn
用BD公司的Matrigel 1:8稀释,均匀铺在小室内膜上,置37 oC状态下30 min,使Matrigel聚合成凝胶。取指数生长期的Huh-7细胞,胰酶消化,终止消化后离心除去培养液,用PBS洗3遍,用含BSA的无血清培养基重悬。调整细胞密度至5×105 ml-1,然后进行铺板。在24孔培养板中,每个孔都加入含15%胎牛血清的80 µL RPM1640完全培养基,分别取Huh-7细胞悬液100 µL加入Transwell小室的上室。加入100 µL的木犀草苷(不同浓度),置于37 oC、5% CO2培养箱常规培养24 h。取出小室,用棉签擦去基质胶和上室内的细胞,用含20%的甲醇和0.1%结晶紫溶液进行染色30 min,放在倒置显微镜下观察并且拍照,随机选取5个低倍视野进行细胞计数 。同类实验重复三次。
木犀草苷对肝癌细胞转移的影响(3):http://www.751com.cn/yixue/lunwen_78900.html