要检测氨基酸螯合物中的游离氨基酸，需先把游离氨基酸分离出来，再用茚三酮显色，用分光光度的方法测定其含量。

1.3.3 显色条件的选择    
1.3.3.1 pH值的选取
张振华指出调节溶液的pH 值各种氨基酸与茚三酮反应颜色有明显变化，pH 值过高、过低都不发生显色。
不管α-氨基酸和茚三酮按何种机理进行,主要的颜色产物都是通过缩合形成的，这种缩合反应在弱酸性条件下易于发生，它类似于羰基化合物和氨的衍生物之间的反应，在酸性条件下，还能减少氨基以外的其它基团对显色反应的干扰，而且生成的颜色在弱酸性条件下较为稳定。在强酸性介质中，虽然能增强茚三酮或1 ,3 - 茚三酮羟基的反应能力，但却大大降了参与缩合反应的氨基、羟基等新核基团的活性，使有色的缩合产物形成困难。另外，缩合产物在强酸溶液中也不稳定,
在碱性条件下，很多基团或化合物的还原能力得到加强,使得茚三酮的显色反应范围扩大,副反应增多，从而使反应、反应产物以及颜色变得复杂化,分子内部因素和外来因素的影响和干扰，不利于茚三酮对α- 氨基酸的检验和测定。在碱性下,颜色的不稳定也妨碍了对α- 氨基酸的准确分析。
综上所述，α- 氨基酸和茚三酮的显色反应宜在弱酸性下进行。即pH = 4～7 或5～7 最为适宜[14]。
1.3.3.2还原剂的选取
目前经任何分离手段得到的氨基酸都采用茚三酮显色来定性、定量分析, 为使显色反应完全和稳定，必须选择适当的还原剂，经典比色法所用的氰化钠、氯化亚锡、三氯化钛等作为还原剂。抗坏血酸分子中有两个羟基，其中的氢可解离作为氧化抑制剂, 比其他还原剂具有较大的还原潜力。在本次试验中我们选用抗坏血酸作为还原剂[15]。
1.4研究目的和内容
本研究有两个目的：
一、对原有的非水滴定法进行改进，解决在滴定过程中的返色问题和滴定终点变色不明显的缺陷。
二、研究开发比色法测定甘氨酸亚铁中的游离甘氨酸。
 
2实验内容
2.1非水滴定法
2.1.1仪器
本实验中所用的仪器见表2.1
表2.1 实验仪器
仪器名称    型号/规格    生产厂家
坐式微量滴定管    5 mL    国药集团化学试剂有限公司
锥形瓶    250 mL    申玻
量筒    100 mL    申玻
酸式滴定管    50 mL    申玻
循环水式真空泵    SHZ-D（Ⅲ）    予华仪器厂
电子天平    FA2004    上海海康电子仪器厂
2.1.2试剂
本实验中所用的试剂见表2.2
表2.2实验试剂
药品名称    规格    生产厂家
高氯酸    分析纯    国药集团化学试剂有限公司
冰乙酸    分析纯    国药集团化学试剂有限公司
醋酸酐    分析纯    国药集团化学试剂有限公司
邻苯二甲酸氢钾    分析纯    国药集团化学试剂有限公司
结晶紫指示剂    分析纯    国药集团化学试剂有限公司
甘氨酸亚铁    分析纯    国药集团化学试剂有限公司
2.1.3甘氨酸与甘氨酸亚铁的溶解度测定
取50 ml冰醋酸溶液于干净烧杯中，称取一定量的甘氨酸固体记录数据，从中移取少量甘氨酸固体至冰醋酸中，记录剩余甘氨酸固体质量，待甘氨酸完全溶解后，继续重复上述操作，待甘氨酸不再溶解时用减量法计算出甘氨酸在冰醋酸中的溶解度。 甘氨酸亚铁中游离甘氨酸含量测定方法的研究(3):http://www.751com.cn/huaxue/lunwen_7743.html