取50 ml冰醋酸溶液于干净烧杯中，称取一定量的甘氨酸亚铁螯合物记录数据，从中移取少量甘氨酸亚铁螯合物至冰醋酸中，记录剩余固体质量，待甘其完全溶解后，继续重复上述操作，待甘氨酸亚铁螯合物不再溶解时用减量法计算出其在冰醋酸中的大致溶解度[16]。
2.1.4高氯酸标准液标定
取0.7~0.9毫升70%的高氯酸与500毫升冰醋酸混匀后，加入30毫升醋酸酐摇振，使充分混合，用冰醋酸稀释至1000毫升。静置过夜，使醋酸酐与水充分反应，此溶液贮藏于棕色瓶中，临用前标定。
取一定量结晶紫固体颗粒溶于100ml冰醋酸中配置成结晶紫指示剂溶液。
精确称取邻苯二甲酸氢钾（110度恒重）约0.03克，溶于50毫升冰醋酸中，结晶紫指示剂5～6滴，用高氯酸的冰醋酸溶液滴定至蓝绿色为终点。[17]
高氯酸浓度= 邻苯二甲酸氢钾质量(g)/[0.2042*所消耗高氯酸溶液体积(mL)]
2.1.5游离甘氨酸含量测定
未改进的游离甘氨酸测试方法按国标《GB/T 21996-2008 饲料添加剂 甘氨酸铁络合物》进行。改进后的测试方法和步骤如下：
(1). 称取0. 5 g甘氨酸亚铁，置于烧杯加入30 ml冰醋酸，搅拌10分钟后静置5min、10min、30min、60min后抽滤2次，滤液转入250ml锥形瓶中，加入5~ 6滴结晶紫指示剂。溶液此时显紫红色。
(2). 用一标定的高氯酸标准溶液进行滴定，溶液由紫红色变为蓝绿色为滴定终点。
(3). 做平行实验。
计算公式[18]：游离甘氨酸(%) = [c×V×0.07507/m] ×100
式中：C为高氯酸标准溶液的浓度，单位为摩尔每升(mol/L)；V为试样消耗高氯酸标准滴定液的体积，单位为毫升(ml)；0.07507为与1.00ml高氯酸标准滴定溶液[c(HClO4)=1.000mol/L]相当的氨基乙酸的质量，单位为克(g)；m为试样的质量，单位为克(g)。
2.2茚三酮分光光度法
2.2.1仪器
本实验中所用的仪器见表2.3
表2.3实验仪器
仪器名称    型号/规格    生产厂家
容量瓶    25ml，100mL    申玻
量筒    100mL    申玻
电子天平    FA2004    上海海康电子仪器厂
双光束紫外可见分光光度计    TU-1901    北京普析通用仪器有限责任公司
移液枪    100-1000μL    大龙兴创实验仪器(北京)有限公司
电热恒温水浴锅    HHS型    上海博讯实业有限公司医疗设备厂
2.2.2试剂
本实验中所用的试剂见表2.4
表2.4实验试剂
药品名称    规格    生产厂家
茚三酮    分析纯    国药集团化学试剂有限公司
抗坏血酸    分析纯    国药集团化学试剂有限公司
无水醋酸钠    分析纯    国药集团化学试剂有限公司
甘氨酸    分析纯    国药集团化学试剂有限公司
甘氨酸亚铁    待测样品    自备
冰醋酸    分析纯    国药集团化学试剂有限公司
乙醇    分析纯    国药集团化学试剂有限公司
乙二醇-甲醚    分析纯    国药集团化学试剂有限公司
茚三酮溶液（3%）：3克茚三酮溶于100 ml（1:1）乙二醇-甲醚中。保存于棕色瓶，置于冰箱，用时取出。
抗坏血酸（0.3%）：0.3克抗坏血酸100 ml去离子水中。保存于棕色瓶，置于冰箱，用时取出。
1mol/L醋酸钠溶液：8.2 g无水醋酸钠固体溶于100 ml去离子水中，保存与试剂瓶中[19]。 甘氨酸亚铁中游离甘氨酸含量测定方法的研究(4):http://www.751com.cn/huaxue/lunwen_7743.html