1 实验部分
1.1 实验所用材料、试剂及仪器
材料：黑豆，低温烘干，粉碎备用。
试剂：无水乙醇、磷酸氢二钠、高氯酸、三羟甲基氨基甲烷、盐酸、邻苯三酚、邻二氮菲、硫酸亚铁、30%过氧化氢、磷酸二氢钠、冰醋酸、氢氧化钠。
仪器：AR124CN电子天平（奥豪斯仪器有限公司）；SH2-D(Ⅲ) 循环水真空抽气泵（郑州市亚荣仪器有限公司）；ZBE70-35制冰机（Ziegra-Eismaschinen GmbH）；DHG-2150B电热鼓风干燥箱（郑州生元仪器有限公司）；D8028TL-K4C格兰仕微波炉（格兰仕集团有限公司）；HH-S4恒温水浴锅（巩义市予华仪器有限责任公司）；V-5000可见分光光度计（上海元析仪器有限公司）。
1.2 实验方法
1.2.1皂苷测定
1.2.1.1 标准液的配制
以齐墩果酸为标准品，准确称取干燥至恒重的齐墩果酸对照品10 mg放入烧杯中，加无水乙醇，使之溶解，移动至10 mL容量瓶中，定容，摇匀即浓度为1 mg/mL的标准对照液。
1.2.1.2 皂苷标准曲线的绘制[7]
绘制标准曲线得到标准曲线方程：y=32.051x-0.0052，R=0.9976。
  齐墩果酸标准曲线
1.2.1.3皂苷提取工艺流程
流程如下：黑豆→干燥，去皮→粉碎过筛→微波辅助提取→提取液抽滤→浓缩→乙醇溶解定容→稀释→测定。
1.2.1.4 皂苷提取率的测定
取1 mL稀释样品液，置于具塞试管内，进行70℃水浴，待乙醇挥干，分别滴入0.2 mL 5%香草醛—冰醋酸溶液、0.8 mL高氯酸，混合均匀、置60℃恒温水浴中加热15 min，其后冰水冷却5 min，加入冰醋酸，5 mL，摇动均匀、以空白试剂做对照，在波长540nm处测定其吸光度。根据回归方程算出测量皂苷的C（μg/mL），按照以下公式计算提取物皂苷的提取率（%）。
皂苷的提取率（%）=CVK×10-4/W
1.2.2 单因素实验及正交试验
分别以微波功率、料液比、乙醇浓度、微波时间做4个单因素实验，得出每一个实验的最佳皂苷提取率所对应的因素。为了确定四个因素同时对黑豆皂苷提取率的影响，采用L9(34)正交表[8]对以上4因素进行正交试验。
1.2.3 抗氧化活性
1.2.3.1 黑豆提取液对超氧阴离子自由基（O2-•）清除活性[9]
1.2.3.2 黑豆提取液对羟自由基（•OH）清除活性[10]
2 结果与讨论
2.1 单因素试验
2.1.1 微波功率的选择
在乙醇浓度为70%，料液比1:15，微波2 min条件下，提取两次，抽滤，合并提取液，研究不同微波功率低火、解冻、中火、中高火、高火对黑豆皂苷提取率的影响。
微波功率对黑豆皂苷提取率的影响
由图1可知，微波功率对皂苷提取率影响在中高火时达到最大，功率加大提取率反而下降。原因是当微波辐射一定时，微波功率越高，单位时间内产生能量越多，物质升温越快，分子无规则运动越剧烈，扩散速度越大，溶解速率也越大，这样有利于皂苷的提取。当微波功率过高时，高温时物质内液体沸腾溢出，难以高效提取[11]。故波功率初步选择为中高火。
2.1.2 料液比的选择
在微波功率为中高火，乙醇浓度70%，微波时间2 min下，提取两次，抽滤，合并提取液，研究不同料液比1:10、1:15、1:20、1:25、1:30对其影响。 黑豆皂苷提取工艺及抗氧化活性研究(2):http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_38776.html