2  材料和方法

2.1  材料与试剂

2.1.1  菌株

菌株：2014-2015年间自淮安某猪场分离鉴定的12株猪链球菌

2.1.2  试剂及培养基

无菌脱纤维绵羊血购自南京便诊生物科技有限公司；

M-H琼脂培养基是OXOID品牌的。

2.1.3  药敏试纸及抗生素

药敏试纸购自杭州微生物试剂有限公司，共20种，药物如下：红霉素，米诺环素，多西环素，四环素，新霉素，卡那霉素，庆大霉素，丁胺卡那，头孢哌酮，头孢曲松，头孢呋辛，头孢他啶，头孢唑林，头孢拉定，头孢氨苄，哌拉西林，羧苄西林，氨苄西林，苯唑西林和青霉素。

2.2  实验方法

2.2.1  培养基配置

 称取7.6g M-H 琼脂培养基于200mL蒸馏水中，搅拌均匀。放在高压灭菌锅中灭菌15分钟，待灭菌锅温度降到50度左右拿出培养瓶。在培养瓶中加入10mL的无菌脱纤维绵羊血，充分混匀，在培养基凝固之前尽快倒完，倒平板的厚度约为4mm。

2.2.2  药敏实验

采用纸片扩散法，将分离得到的12个菌株分别放在LB培养基中培养18~24小时，用无菌生理盐水将菌液浊度调至0.5麦氏单位，直接将这个盐水悬浊液作为接种物。接种物的悬浊度调节好后，最好在15分钟内接种，用无菌棉签蘸取调好的菌液，在悬浊液面上方管壁处旋转反复挤压几次，挤出过多的菌液。用无菌棉签在无菌的干燥的加5%无纤维绵羊血的M-H琼脂培养基表面涂布接种，接种的时候应该保证菌液均匀分布，最后还应该用无菌棉签涂抹培养基的边缘。文献综述

在贴药敏纸片之前，可以将培养皿半开3~5分钟，但不超过15分钟，以便表面过多的水分被吸收。最后将药敏纸片贴于接种好菌的平板表面，每个药敏纸片都要轻压一下，确保与琼脂表面完全接触。药敏试纸应均匀分布，中间间距不小于24毫米，因为有些药物会立刻扩散，所以试纸只要一接触培养基表面就不应再移动位置，应该在其他地方贴新的试纸。同时贴不同的药敏试纸时使用的镊子应在酒精灯上烧一下，防止不同的抗生素之间污染。贴完药敏试纸后，应在15分钟内将平板倒扣，放在恒温培养箱中37℃培养18~20小时后，测量抑菌圈的大小，实验结果为3次测量的平均值