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抗PDI因子(Anti-PDI Factor)生物检测系统的构建(3)

时间:2021-03-04 21:07来源:毕业论文
1.3病原细胞的抗药 细胞的抗药性又称作细胞耐药性,指的是病原体以及肿瘤细胞等对化学药物敏感性降低。当药物不能杀死或抑制病原的时候,抗药性就

   1.3病原细胞的抗药

细胞的抗药性又称作细胞耐药性,指的是病原体以及肿瘤细胞等对化学药物敏感性降低。当药物不能杀死或抑制病原的时候,抗药性就等于药物剂量使用失败或者药物耐受。

抗药性指的是生物(病原微生物或病原细胞)对抗生素等化学药物产生的抵抗和耐受能力。细胞抗药性的产生会造成原来正常剂量的药物不能再发挥应有的杀菌效果的现象,甚至使药物完全失去杀菌效果,从而给一些疾病的治疗造成很大的困难,并且容易造成抗药疾病蔓延。目前,多数科研工作者认为抗药性的产生是由于微生物基因发生突变造成的。细胞的抗药性变异一旦产生,就可以遗传给后代,而且还可以转移给原来无抗药性的药敏菌,使抗药菌的数量不断增加。现实生活中为防止和减少抗药菌的产生,主要应注意下面两个方面:一是要不断改进和研制新型的抗生素;二是坚持合理使用药物。由于细胞抗药性的产生往往与用药物使用剂量不足、长期盲目使用各种抗生素等药物使用不恰当的作法有很大的关系,所以合理使用药物是防止和减少抗药菌产生的重要一步。

   1.4人体内的PDI

PDI是存在于真核细胞内质网上的一种异构酶,它能够催化二硫键的断裂、生成和重组。当PDI处于激活态的时候,卵巢癌病变细胞表现出较强的抗药性;当有抗PDI因子存在时,它可以和PDI上的活性基团半胱氨酸结合形成一个共价键,降低了PDI 的活性,使其处于失活状态,从而降低了病变细胞的抗药性。抗PDI因子对卵巢癌的治疗效果现在还在进一步的研究之中,所以我们需要寻找一种强有力的、有效的、安全的口服小分子抗PDI因子来治疗卵巢癌的伴侣药物。

   1.5大肠杆菌内的dsbA基因

大肠杆菌是一种常用的菌种,具有使用方便、易于培养、价格低廉等优点。大肠杆菌的基因组DNA上有一个叫做dsbA的基因,约600bp大小。它在细胞内能发挥与人体的PDI相同的功能,即能够促使MalF形成二硫键而正确的折叠,导致LacZ被输送到周质空间,周质空间是其发挥功能的场所,直接导致病变细胞产生抗药性,所以本实验在使用大肠杆菌作为载体菌株的时候要先对其内部的dsbA基因进行敲除,消除它对实验结果的干扰。

dsbA的基因序列如下:

ATGAAAAAGATTTGGCTGGCGCTGGCTGGTTTAGTTTTAGCGTTTAGCGCATCGGCGGCGCAGTATGAAGATGGTAAACAGTACACTACCCTGGAAAAACCGGTAGCTGGCGCGCCGCAAGTGCTGGAGTTTTTCTCTTTCTTCTGCCCGCACTGCTATCAGTTTGAAGAAGTTCTGCATATTTCTGATAATGTGAAGAAAAAACTGCCGGAAGGCGTGAAGATGACTAAATACCACGTCAACTTCATGGGTGGTGACCTGGGCAAAGATCTGACTCAGGCATGGGCTGTGGCGATGGCGCTGGGCGTGGAAGACAAAGTGACTGTTCCGCTGTTTGAAGGCGTACAGAAAACCCAGACCATTCGTTCTGCTTCTGATATCCGCGATGTATTTATCAACGCAGGTATTAAAGGTGAAGAGTACGACGCGGCGTGGAACAGCTTCGTGGTGAAATCTCTGGTCGCTCAGCAGGAAAAAGCTGCAGCTGACGTGCAATTGCGTGGCGTTCCGGCGATGTTTGTTAACGGTAAATATCAGCTGAATCCGCAGGGTATGGATACCAGCAATATGGATGTTTTTGTTCAGCAGTATGCTGATACAGTGAAATATCTGTCCGAGAAAAAATAA

   1.6博来霉素抗性基因ble

博来霉素(bleomycin)是从轮枝链霉菌分离得到的一种糖肽抗生素,它的作用机理是因为它能够阻断细胞周期中的G2,在细胞的同步培养中起到诱导作用,有时候还用于抗癌药物中。质粒pDGICZ中含有一个大约440bp的基因片段,该片段是对博来霉素具有抗性的基因,若把该基因片段重组到大肠杆菌的DNA上,那么大肠杆菌就可以在含有博来霉素的培养基上生长。这是筛选具有博来霉素抗性基因的基本方法。Ble的基因序列如下:论文网

CTTGATATGGCTTTTTATATGTGTTACTCTACATACAGAAAGGAGGAACTAAATATGGCCAAGTTGACCAGTGCCGTTCCGGTGCTCACCGCGCGCGACGTCGCCGGAGCGGTCGAGTTCTGGACCGACCGGCTCGGGTTCTCCCGGGACTTCGTGGAGGACGACTTCGCCGGTGTGGTCCGGGACGACGTGACCCTGTTCATCAGCGCGGTCCAGGACCAGGTGGTGCCGGACAACACCCTGGCCTGGGTGTGGGTGCGCGGCCTGGACGAGCTGTACGCCGAGTGGTCGGAGGTCGTGTCCACGAACTTCCGGGACGCCTCCGGGCCGGCCATGACCGAGATCGGCGAGCAGCCGTGGGGGCGGGAGTTCGCCCTGCGCGACCCGGCCGGCAACTGCGTGCACTTCGTGGCCGAGGAGCAGGACTGAGGATCC  抗PDI因子(Anti-PDI Factor)生物检测系统的构建(3):http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_70826.html

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