1.3.5 16S rDNA法[16]鉴定腐败菌 以27F(5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’)和1492R(5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’) 为引物,聚合酶链式反应(PCR)扩增菌株的16S rDNA基因。反应体系为25 μL:GoTaq Green Master Mix (2×)12.5 μL;上下游引物各1 μL,模板DNA4 μL,加无菌去离子水补至25 μL。PCR反应程序为:94 ℃预变性5 min;94 ℃变性1 min,55 ℃退火1 min,72 ℃延伸90 s,30个循环;72 ℃延伸10 min;结束后4 ℃保温。送至上海生工生物工程股份有限公司测序,测序引物与扩增引物相同,测序长度为1500 bp左右。登陆NCBI(National Center for Biotechnology Information,美国国立生物技术信息中心)网站,将所得序列到网站进行BLAST比对,获得相似性98 %以上的菌株,将菌株的核酸序列用ClustalX2软件进行多重序列比对后,用MEGA5.10软件构建系统发育树。
1.3.6 鸡肉培养基(Cooked-meat Juice Agar)的制作 将鸡胸肉切片(约0.5 cm厚),在80 ℃水浴锅中煮熟(10 min),剪碎匀浆,纱布滤去肉糜。浆液与琼脂溶液水浴60 ℃保温,混合后倒平板,6 KGy剂量的60Co辐照灭菌。配置琼脂溶液和匀浆时加入的液体为磷酸盐缓冲液(pH 7.2,0.1 M)。培养基中肉的含量为10 %,琼脂含量为0.8 %。
1.3.7 分解圈法测定菌株对肉蛋白的分解能力 调整处于对数生长期的细菌培养液OD600值至0.4左右,取2 μL点样至鸡肉培养基,25 ℃培养,每天测量分解圈的直径大小,用毫米(mm)表示。
2 结果分析与讨论
2.1 细菌菌落特征
本试验共分离鉴定出313个菌株。通过对菌株在TSA平板上的单个菌落形态进行观察,结果如表1。由表可知,分离出的菌株菌落特征各种各样,颜色以白色和黄色为主,形状多为规则,隆起度有平、微隆、低凸,质地有奶油状、湿润、粘稠拉丝的特征,透明度分为不透明、半透明和透明,菌落大小从大到中到小均有出现。此外,不同产品分离出的部分菌株菌落特征相同。 西式肉制品中腐败菌的分离鉴定及腐败性能分析(3):http://www.751com.cn/shiping/lunwen_37884.html