1 实验部分
1.1 主要试剂与仪器
试剂 纯度 出厂公司
十二烷基硫酸钠(SDS) 分析纯 天津市化学试剂有限公司
硼砂 分析纯 天津市凯通化学试剂公司
磷酸二氢钠 化学纯 上海新华化工厂
盐酸特比萘芬片 齐鲁制药有限公司
仪器名称 出厂公司
P/ACE MDQ 型毛细管电泳仪(带二极管阵列检测器、毛细管) 美国 Beckman 公司
PHS-3C型精密酸度计 上海大普仪器有限公司
电子天平 AL204梅特勒-托利多仪器有限公司
水浴锅 浙江余姚工业一表二厂
1.2 实验方法
1.2.1 标准溶液的配制
盐酸特比萘芬标准溶液:在实验室里,通过电子分析天平得到需要用到的盐酸特比萘芬一片,记录好试验药品的量后,将药剂放入到烧杯中,按实验比例要求,加入已取好的0.1 M的甲醇,放在40 ℃的水浴中开始溶解,溶解时间为20 min,之后放置至实验室温度,过滤,用玻璃棒把滤液转入实验室用到的250 mL的容量瓶里,最后用0.1 M的甲醇溶液定容,制得浓度为1.574 mg/mL的溶液待用。
SDS标准溶液:在实验室里,通过电子分析天平得到需要用到的SDS 7.112 g将药剂直接放入实验室用到的250 mL容量瓶中,加入已取好比例的蒸馏水后,将其放在40 ℃的水浴中溶解,放置冷却到实验室温度,等到气泡慢慢消失之后用蒸馏水进行定容,制得0.1 M SDS 溶液待用。
磷酸二氢钠标准溶液:在实验室里,通过电子分析天平得到需要用到的磷酸二氢钠3.9077 g,将药剂直接放入到实验室所用的250 mL的容量瓶里,再加入已准备好的蒸馏水开始溶解,溶解后将之冷却到实验室温度,最后用蒸馏水进行定容,制得0.1 M标准储备溶液待用。
硼砂储备液:在实验室里,通过电子分析天平得到需要到的硼砂3.8159 g放入实验室的烧杯里加已按比例取好的蒸馏水,把刚才的烧杯放在40 ℃水浴中进行溶解,溶解后冷却至实验室的温度,用实验所用的玻璃棒引流至100 mL的容量瓶里,再用蒸馏水稀释定容,源Z自+751=文@论(文]网[www.751com.cn,制得0.1 M的硼砂溶液待用。
1.2.2 毛细管的处理
将分别装有:600 mM盐酸溶液、500 mM氢氧化钠溶液、蒸馏水、分离缓冲液的仪器配套的小瓶子放入已打开的仪器中,操作页面让上述每种溶液按顺序各洗5 min。在每次实验之前分别用上述溶液冲洗0.5 min。
2 结果与分析
2.1 缓冲液组分的探究
查阅参考文献得知可得到较好峰形的缓冲液的组成有以下两种:由20 mM磷酸二氢钾、30 mM SDS 组成的缓冲液和由20 mM硼砂、30 mM SDS 组成的缓冲溶液。在进行测定时,实验条件仅改变了缓冲液,本次实验探究首先对由磷酸二氢钾和SDS组成的缓冲液进行了连续地考察,观察电泳谱图,发现在这种缓冲液下电泳图中并没有出现峰;之后将分离时间由5 min改为10 min,仍没有出峰;将电压由18.0 KV改为24.0 KV、分离时间改为15 min,仍然没有出峰并且电流也不稳定;于是,实验对第二种缓冲液进行考察并将电压调为21 KV,此时观察电泳图中出峰,峰形好,并确定分离时间为2.6 min。