氟他胺与牛血清白蛋白的相互作用(2)

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氟他胺 (Flutamide)，又名氟硝丁酰胺，氟他米特，缓退瘤，福至尔，氟利坦，是淡黄色针状结晶，其化学组成为2-甲基-N-[4-硝基-3-三氟甲基苯基]丙酰胺。氟他胺用于前列腺癌或良胜前列腺肥大，是非甾体类抗雄激素药物[3]。除抗雄激素作用外，无任何激素的作用。其代谢产物小羟基氟他胺是其主要活性形式，能在靶组织内与雄激素受体结合，阻断二氢睾丸素（雄激素的活性形式）与雄激素受体结合，抑制靶组织摄取睾丸素，从而起到抗雄激素作用[3]。但此作用可反馈性地引起FSH和LH释放增加，使睾丸酮的血浆浓度上升。当本品与促性腺激素释放激素（GnRH）如亮脯利特（leuprolide）一起使用时，可完全阻断雄激素而且防止代偿性增加。

常用的药物分析方法有重量分析法、滴定分析法、色谱分析法(包括柱色谱法、纸色谱法、薄层色谱法、离子交换色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法、固相微萃取、高效毛细管电泳等)、光化学分析法(包括红外和紫外-可见分光光度法、荧光光谱法、化学发光法、磷光分析法、原子吸收光谱法、质谱法、共振光散射等) 、电化学分析法等。荧光法以其灵敏度高、选择性好、操作简便等优点受到分析工作者的青睐。将荧光光谱分析法应用于药物分析，已在药物有效成分分析鉴定、药物代谢动力学研究、临床药理与药效分析等方面取得长足发展。并广泛应用于生化分析、生物医学、临床分析等领域的痕量分析[4]。光谱法特别是荧光光谱、同步荧光技术等已经成为研究生物大分子与小分子、离子相互作用的重要手段。通过荧光光谱技术可以获得蛋白质分子中荧光生色基团的种类、结构和所处微环境及其分布情况等有用信息，同时还可以得到外源物质与生物大分子相互作用的有关数据。

本文在模拟生理介质条件下，采用荧光法和紫外光谱法研究了氟他胺与 BSA结合反应的光谱特征，着重探讨氟他胺对牛血清白蛋白的荧光猝灭作用机制，计算了氟他胺与牛血清白蛋白结合常数、结合位点数及作用距离，并用同步荧光光谱研究了氟他胺对 BSA 构象的影响。源^自·751·文.论,文'网]www.751com.cn

氟他胺的分子结构

Fig.1 Molecular structure of Flutamide.

2 实验部分

2.1 试剂和仪器

Perkin Elmer LS55 荧光分光光度计(英国)，使用 1 cm 石英比色皿；TU 21901 紫外可见分光光度计(日本岛津) 。

配置 1.0×10-4 mol·L-1 牛血清白蛋白 (BSA) (上海惠兴生化试剂有限公司) 作为储备液保存于 0～4 ℃，使用时适当稀释；遮光操作，配置 1.0×10-3 mol·L-1 氟他胺(哈尔滨制药总厂) 作为储备液保存于 0～4 ℃，使用时适当稀释；pH = 7.4 的 Tris (三羟甲基氨基甲烷)缓冲溶液；其余药品均为分析纯；实验用水为亚沸二次蒸馏水。

2.2 实验方法

2.1.1 BSA的荧光光谱

10 mL 比色管中依次加入 2 mL 0.1 mol·L-1 NaCl 溶液、2 mL pH = 7.4 的 Tris 缓冲溶液、400 uL BSA 储备液、不同量的氟他胺储备液，二次水定容，放置 30 min，在 λex/λem = 280/350 nm，扫描 BSA 的荧光光谱及在氟他胺作用下的荧光猝灭光谱。在 Δλ = 15 nm和 Δλ = 60 nm 时扫描酪氨酸和色氨酸的同步荧光。1 cm 比色皿，激发和发射狭缝均为 5 nm。