熊果酸标准样品的配制:准确称取0.0170g熊果酸标准样品,用甲醇(AR)充分溶解并定容于50mL容量瓶中,得浓度为0.3400mg/mL的熊果酸储备液,经0.45μm滤膜过滤后备用。
齐墩果酸标准样品的配制:准确称取0.0075g标准样品,用甲醇(AR)充分溶解并定容于50mL容量瓶中,得浓度为0.1500mg/mL的齐墩果酸储备液,经0.45μm滤膜过滤后备用。
柿叶样品的提取:根据文献记载[6],超声提取具有能耗低、效率高的优点,故本次实验采用超声提取。将冷冻干燥过的柿叶样品经粉碎机粉碎,精确称取柿叶样品2.5g,置于100mL烧杯中,加适量乙醇浸泡,轻轻摇晃后将其置于超声(53KHz,25℃)下提取30min后抽滤,剩余固体在上述条件下再重复超声抽滤两次,合并三次上层清液转移至圆底烧瓶内,旋转蒸发至液体量低于25mL,再将液体转移至25mL容量瓶中,用95%的乙醇定容至刻度线处,得0.1g/mL的样品提取液,密封容量瓶,保存至冰箱里待测。
2.3.2 标准样品的HPLC测定
分别取儿茶素、橙皮素、熊果酸、齐墩果酸标准溶液各1.0mL,经过滤膜分别注入编号为1、2、3、4的四个进样瓶中,根据2.2中的色谱条件进样,测得四者的HPLC图如图1。再分别取儿茶素、熊果酸、齐墩果酸、稀释10倍的橙皮素四种标准溶液各2mL混合均匀后装进a瓶,抽取1mL混标,经过滤膜后注入编号为5的进样瓶中,在2.2的色谱条件下进样,测得HPLC图谱,结果如图2。根据得到的HPLC图谱,确定标准样品的保留时间。论文网
2.3.3 标准曲线的确定实验
用2.3.3中四种储备液各配制一系列不同浓度(原浓度、稀释5倍、10倍、15倍、20倍)的5种标样的溶液,经滤膜过滤后分别注入进样瓶,按进样量10μL进样,以标准溶液中所含待测物质的质量为X轴,峰面积为Y轴作图,得到儿茶素、橙皮素、熊果酸和齐墩果酸的标准曲线。
2.3.4 精密度实验
根据参考文献,取柿子叶样品的超声提取液,在2.2色谱条件下做谱图,平行测定4次。