(Schizosaccharomyces pombe)中分离得到的。此后,结构功能与之相似的另外4类⼩分
⼦多肽相继被发现。植物中产⽣的PCs种类依物种和品种及诱导的重⾦属种类的不同⽽
不同。
⽬前为⽌,植物络合素的测定⽅法主要有分光⽐⾊法、凝胶过滤法、液相⾊谱法和
⽑细管电泳法,其中以液相⾊谱法最为常见。由于巯基化合物的极性较强,易氧化、难保留, 且在紫外光区⽆吸收、⽆荧光特性,因此柱前或柱后 衍⽣技术成为⽬前巯基
化合物分析的常⽤⼿ 段。 其中最经典的⽅法是 Ellman 试剂(5,5ʹ⁃ ⼆巯双(2⁃硝基苯甲
酸), DTNB) 柱后衍⽣紫外检测法[2]
,但该⽅法需要特殊的柱后反应器,且存在 分析
时间长、灵敏度不够⾼( 检出限为 nmol 量级) 等缺点。 柱前衍⽣液相⾊谱⁃质谱联⽤技
术虽具有 较⾼的灵敏度(检出限可达 pmol 量级),但仪器设 备昂贵,分析费时[2;3]
。
⽽超⾼效液相⾊谱( UPLC )检测可以解决上述问题,与传统的⾼效液相⾊谱
(HPLC)相⽐,UPLC具有很多优势:⾼分离,⽽根据范迪姆特(Van De emt e r)⾊谱
理论,柱效反⽐于系统固定相粒度⼤⼩。UPLC系统运⽤的固定相粒度能达到1.7μm,
根据上述⽅程,该系统达到的效能将⽐5μm粒度系统⾼70%,⽽⽐3.5μm⾼40%;⾼速
度,在保证得到同样质量数据的前提下,UPLC能提供单位时间内更多的信息量;灵敏
度,UPLC能提⾼柱效N,从⽽使峰宽w变的更窄,⽽峰⾼却增加了,同时,由于UPLC
运⽤了更短的柱⼦(柱长L更⼩),进⼀步增加了峰⾼。因此,在提⾼柱效的同时,运
⽤1.7μm的UPLC系统⽐5μm和3.5μm的系统灵敏度分别提⾼了70%和40%,⽽在柱效下
相同情况下,能分别提供3倍和2倍的灵敏度;成本低,与HPLC相⽐,超⾼效液相⾊谱
检测法⼤⼤的节省试剂的使⽤,从⽽节约了成本[4]
。
超⾼效液相⾊谱法在植物Cys、GSH和PCs的检测⽅⾯应⽤越来越多,但对于实验条
件的具体优化普遍处于摸索阶段。在样品提取阶段和衍⽣化阶段实验⽅法的优化对于
测量的准确性有⾄关重要的影响。加标回收试验是实验室质量控制的⼀个重要⼿段,
是⼀种很好的优化实验条件的验证⼿段,加标回收试验原理简单,操作较为简便,有
很⾼的应⽤价值,加标回收试验在我校还没有开始⼤⾯积应⽤,本试验运⽤加标回收
试验原理寻找、检验最优实验条件。由于加标回收率能够很好的反应某种试验⽅法得
出的测量结果的准确度,所以将其运⽤到植物络合素的液相⾊谱检验中对试验分析的
准确度有良好的监控作⽤,所以也是⼀种⾼效简便的寻找最优实验条件的⽅法。加标
回收试验还能够及时发现误差来源[5]
,分析可发现是系统误差还是偶然误差,这对于
提出相应优化⽅法和提⾼检测⼈员的技术⽔平都有很⼤帮助。
1 材料与方法
1.1 标准液的配制
分别称取适量各巯基化合物标准品,⽤ 0.1% TFA 溶液(含 6.3 mmol/ L DTPA)配制成质
量浓度均为 100 mg / L 的单标准储备液,置于 4 °C 下保存。 使⽤时,根据需要逐级稀
释成不同质量浓度的混合标准⼯作液。
1.2 苗期⼩⻨的培养与处理
选取⼤⼩⼀致的⼩麦种⼦,⽤10% H2O2(w/w)表⾯消毒15分钟,冲洗⼲净后⽤去离
⼦⽔浸泡12h。然后将⼩麦播于⽯英砂中萌发,3天后选取⽣长⼀致的⼩麦幼苗移⼊
1.1L的盆钵中⽤1/4 Hoagland营养液培养。培养三天后,⽤10 µmol/L的As处理三天后
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