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1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1实验动物
实验用蚂蟥由南京农业大学中药材研究所蚂蟥实验室提供,经史红专副教授鉴定为蚂蟥Whitmania pigra Whitman;实验所用螺蛳(采自南京前湖,野生)为梨形环棱螺Bellamya purificata Heude。
1.1.2实验仪器
电子
天平(山海精密仪器厂);实时荧光定量PCR仪(美国ABI Step one7500);PCR仪(PTC-200,bio-RAD);电泳仪(DYY-6C,北京751一仪器厂);凝胶成像仪(JS-380,上海培清科技有限公司);SYBR® Premix Ex Taq™ (Tli RNaseH Plus)(上海皓嘉科技发展有限公司);PrimeScript. RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time) (上海皓嘉科技发展有限公司)
1.1.3实验试剂
loading buffer;Marker;TRIzol;RNAiso plus(宝
生物
工程有限公司(大连));琼脂;氯仿;异丙醇;乙醇
1.2方法
1.2.1实验设计
实验用蚂蟥采自南京农业大学中药材研究所蚂蟥实验室,选取健康蚂蟥(Whitmania pigra)活体材料100条,体重约为15 g,根据冬眠周期分为5组处理,分别为:
(1)对照组(active leeches,AC)
(2)初冬眠组(entrance into hibernation,EH)
(3)深冬眠组(deep hibernation,DH)(4℃以下培养超过50天)
(4)早期苏醒组(early arousal,EA)(深冬眠的蚂蟥复温25℃,0.5h)
(5)出冬眠活跃组(active after hibernation,AAH)
每组随机选取3条蚂蟥,至于盛水2/3广口玻璃瓶中。
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