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摘要：【目的】通过对江苏地方猪种的猪皮肤成纤文细胞、骨髓细胞和卵巢颗粒细胞的培养、建系，并建立江苏地方猪种的体细胞库，来保存江苏地方猪种的遗传资源。【方法】分别以组织块培养和胰酶消化培养法对江苏地方猪种的不同种体细胞包括猪皮肤成纤文细胞、骨髓细胞以及卵巢颗粒细胞的分离、培养、传代、冻存、复苏及鉴定方法建立来建立不同细胞库。【结果】采用细胞培养技术培养骨髓细胞传代，培养猪皮肤成纤文细胞能汇合90%，颗粒细胞传代。【结论】通过细胞培养技术的方法可以建立江苏地方猪种的成纤文细胞库、骨髓细胞库、颗粒细胞库。26240
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毕业论文关键词：细胞培养；体细胞库；成纤文细胞；颗粒细胞；骨髓细胞
Isolation and culture of porcine skin fibroblasts, bone marrow cells and ovarian granulosa cells
Abstract:[Objective]Through the culture of porcine skin fibroblast cells, bone marrow cells and ovarian granulosa cell and the establishment of the local pig somatic cell library, we could preserve the genetic resources of local pig in the Jiangsu province. [Methods] we culture kinds of cells including porcine fibroblasts,bone marrow cells and ovarian granulosa cells by using of the tissue block culture method and trypsin digestion tissue culture methed, respectively. Then, isolating, transferring, cryopreservating, resuscitating and identificating these cells is to establish different cell libraries. [Results] Bone marrow cells and ovarian granulosa cells cultured to transfer,.Cultured pig skin fibroblasts reached the density of 90%.[Conclusion]Through cell culture technique, we can establish the local pig fibroblast cell bank, bone marrow cell bank and granule cell bank in Jiangsu.
Keywords:Cells cuture; Somatic cell bank; Fibroblast cell bank; Bone marrow cell bank; Granule cell bank
猪皮肤成纤文细胞、骨髓细胞和卵巢颗粒细胞的分离培养
江苏省地方猪种资源十分丰富。其包括梅山猪、二花脸猪、姜曲猪、东串猪、淮猪（山猪、灶猪、红灯笼猪、淮北猪）、太湖猪（米猪、中梅山、横泾、枫泾、沙乌头）。虽然江苏某些地方猪种在风、繁殖力等有优越性，但由于为了追求体增重、日增重、瘦肉率等商业化目的，我国引进了大量外来品种，地方猪种受到威胁，有的猪种濒临灭绝。目前江苏省各猪种保种场均采取活体保种的方法，但地方猪种资源的保护仍然受到资金、技术、条件、效益的限制[1]。克隆羊 “多莉”[2]的成功为保存哺乳动物种质资源提供了一条新的途径。而且目前体细胞体外培养技术成熟，效率很高，来源广，具有生物个体的全套基因组，可大范围的保存整个群体的遗传资源，也方便有选择地保存优良个体的遗传资源[3]。因此，可成为动物保种的辅助保种方式。
猪培养的细胞是来自猪体的某种器官或组织的细胞，在模拟的体内生理条件下在体外进行培养，使之存活和生长。近年来，猪的细胞系被建立，得到广泛的应用。目前，根据大量的文献报道，国内已成功培养和应用三十余种猪的细胞，其分别是成纤文细胞型、上皮样细胞型、游走型细胞型、多样性细胞型和B细胞、T细胞。成纤文细胞型有成纤文细胞[4-5]，内皮细胞（主动脉内皮细胞[7]、脑微细胞血管[8]、角膜[9]），成骨细胞[10]，成釉样细胞[11]，血管平滑肌细胞[12]，虹膜组织[13]，宫内膜细胞[14]等。上皮样细胞型有角朊细胞[15]，胰岛细胞[16]，脉络丛细胞[17]，黄体细胞[18]，甲状腺细胞[19]，肾细胞[20]等。游走型细胞有原始生殖细胞[21]，脂肪细胞[22]。多形性细胞型有肺脏巨噬细胞[23]，树突状细胞[24]，神经元[25]等。目前，皮肤成纤文细胞培养已广泛应用于大量的体外研究[26]。皮肤成纤文细胞是皮肤中主要的细胞群的一部分。它们在文护正常的皮肤组织和修护受损的结缔组织中起到至关重要的作用。在皮肤的真皮层中，有两种不同的结缔组织层[27]，分乳头层和网状层，乳头层主要由疏松结缔组织中的大量具有生物活性的成纤文细胞组成，网状层很大程度上是由含有少量的有丝分裂活动较弱的成纤文细胞的致密不规则的结缔组织组成[28-29]。在细胞培养方法中，成纤文细胞很容易在牛血清、少量的营养的培养基中生长，在培养皿中成纤文细胞数量会超过其他细胞，常被称为“细胞培养花园中的野草”[30]。