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摘要：血管紧张素转化酶2（angiotensin-converting enzyme 2, ACE2）是2000年首次发现的肾素-血管紧张素-醛固酮系统（renin-angiotensin-aldosterone system, RAAS）的关键性酶。研究发现，ACE2广泛参与消化系统的生理病理过程并发挥重要的作用。我们研究了ACE2在不同生长阶段猪小肠各段中的分布表达情况。研究选取3日龄仔猪、90日龄生长猪和120日龄成年猪的十二指肠、空肠和回肠组织，采用反转录PCR（reverse transcription-PCR, RT-PCR）和荧光定量PCR（Real-time PCR）技术对各肠段组织中ACE2基因分别进行了定性和定量分析。结果显示ACE2基因在不同日龄猪小肠各段均有表达，相对表达量随日龄增长显著升高，120日龄猪表达量极显著上调。结果提示：ACE2在成年猪肠道组织中表达水平较高。26582
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毕业论文关键词：ACE2；猪；小肠；表达
Different expression of angiotensin converting enzyme 2 in the intestinal tissues of different growth stage pigs
Abstract: Angiotensin-conversion enzyme 2（ACE2）is the key enzyme in renin-angiotensin system（RAS）, which was first discovered in 2000. ACE2 is widely involved and plays an important role in the physiological or pathological processes of digestive system. In this study, the mRNA expression levels of ACE2 were investigated in intestinal tissues of pigs at different ages. The 3, 90 and 120 day-old pigs were selected and the duodenums, jejunums and colons were excised. The ACE2 gene was qualitatively and quantitatively analyzed with reverse transcription-PCR（RT-PCR）and Real-time PCR. The result showed that ACE2 was expressed in each segment of the intestines in all the pigs. And the expression levels of ACE2 gene were significantly elevated at day 120, compared to day 3 and day 90. The result suggests that ACE2 has a higher intestinal expression in adult pigs.
Key words: ACE2; pigs; intestine; expression
目 录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
0 引言3
1 材料与方法5
1.1 试剂和仪器5
1.2 试验动物及样品采集5
1.3 引物设计与合成5
1.4 肠道各组织总RNA提取和反转录5
1.5 ACE2的PCR扩增及电泳鉴定5
1.6 不同日龄仔猪胃肠道各组织ACE2 Real-time PCR定量鉴定5
1.7 统计学分析和处理6
2 结果与分析 6
2.1 不同日龄猪肠道中ACE2基因的RT-PCR 6
2.2 不同日龄猪肠道组织中ACE2 mRNA的表达差异7
3 讨论7
致谢10
参考文献10
血管紧张素转化酶2在不同日龄猪肠道中的表达差异
2000年，科学家们在研究和寻找与心衰相关的新基因时首次发现了血管紧张素转化酶2（angiotensin-converting enzyme 2, ACE2）的存在，这是一种与血管紧张素转化酶（ACE）高度同源的多效单羧肽酶[1]。染色体第Xp22位点即ACE2基因所在之处，由805个氨基酸残基聚合而成的1型跨膜糖蛋白。一个相对较短的位于胞内的胞浆尾和一个相对较长的具有羧基单肽酶活性的胞外区域构成了该基因的分子构型。ACE2活性位点包含一个HEMGH基因序列和其他的化学基团，是一种含锌蛋白酶[2]。ACE2是ACE的同系物。研究表明，ACE2的氨基末端约42%与ACE同源[3]，羧基末端Collectrin位点（TMEM27）与血管紧张素转化酶（ACE）高度同源[4]。因而从进化的角度分析，ACE2是一种嵌合型蛋白。不仅ACE在各种组织器官中表达广泛，ACE2的表达情况也大致相同，后者在中枢神经系统、淋巴组织及卵巢中表达较低，而在心脏、某些血管、肾脏、肝脏、睾丸、前列腺、消化道组织以及髂骨骨髓内的表达水平最高。在微观层面，ACE2也广泛存在肾远曲小管上皮细胞、肾小球细胞、肾盂肾盏细胞、支气管上皮细胞等细胞内。这不仅说明ACE2在机体的多数系统和器官内都有表达，而且有可能还在心肾局部肾素-血管紧张素-醛固酮系统（renin-angiotensin-aldosterone system, RAAS）及胃肠道的生理和病理状态下发挥着特殊作用。ACE2的主要生物学功能是水解血管紧张素Ⅱ（AngiotensinⅡ, AngⅡ）并生成血管紧张素（1-7）〔Angiotensin（1-7）, Ang（1-7）〕。生成的Ang（1-7）通过与Mas受体特异性结合形成〔ACE2-Ang（1-7）-Mas〕轴，从而发挥拮抗AngⅡ、扩张血管、抗纤文化、抗增殖、抗炎、抗凋亡、调节水电解质平衡等生物学效应[5]。ACE和ACE2的作用不同：ACE 将AngⅠ转化为AngⅡ，Ang（1-9）转化为Ang（1-7）。在RASS代谢通路中，〔ACE2-Ang（1-7）-Mas〕轴与ACE-AngⅡ-ATl轴起着对抗和平衡的作用[6]。例如在肾脏，ACE-AngⅡ-ATl轴促进水钠潴留、氧化应激、血管收缩、细胞增殖、炎症和纤文化。而〔ACE2-Ang（1-7）-Mas〕轴则通过上调一氧化氮和前列腺素的浓度诱导尿钠排泄，发挥降低氧化应激，舒张血管，抗细胞增殖、抗纤文化和利尿的作用，从而保护肾脏免于损伤。近年来，应用于ACE2的研究技术得到了新的补充和扩展，例如骨髓移植、过表达、基因双敲除和药物干预等，使得对于ACE2的研究逐渐成为新的“热点”。伴随研究的深入，ACE2不但被发现与各种组织器官存在保护关系，还直接或间接的参与氨基酸、葡萄糖等物质代谢过程，并发挥重要的生物学作用。这为人和动物心血管系统、泌尿系统、消化系统和内分泌系统的疾病发病机制的研究和诊治提供了一个新的靶点。