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    (4)加入200μL无 水乙 醇,充分颠倒混匀,再简短离心,去除管壁内侧的水珠。
    注意:在加入无 水乙 醇后,溶液可能会出现絮状沉 淀,但并不影响实验。
    (5)将溶液以及可能出现的絮状沉淀一起转移入放入收集管中的吸附柱CB3中,12000 rpm离心30 s,弃滤液,再将吸附柱CB3放回收集管中。
    (6)加入500μL缓冲液GD(使用前先按照说明要求加入无水乙醇),12000 rpm离心30 s,弃滤液,再将吸附柱CB3放回收集管中。
    (7)加入600 μL漂洗液PW(使用前先按照说明要求加入无水乙醇),12000 rpm离心30 s,弃滤液,再将吸附柱CB3放回收集管中。
    注意:漂洗液PW应沿着吸附柱管壁加入,有助于冲洗沾在管壁上的成分。
    (8)重复操作步骤7。
    (9)12000 rpm离心2min,弃滤液。将吸附柱CB3在室温下静置5 min,晾干残留的漂洗液。
    注意:漂 洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶 切、PCR等)实验。
    (10)将吸附柱CB3转移入干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加30μL洗脱液TE,室温下静置5 min,12000 rpm离心2min。
    (11)再次悬空滴加20 μL洗脱液TE,室温下静置5 min,12000 rpm离心2 min,最后将溶液转移。
    注意:洗脱液TE的体积至少要50μL,体积过小过大均会影响回收效率。洗脱前,可先将洗脱液TE放入56℃烘箱预热,以提高DNA的回收效率。DNA产物应保存在-20℃的冰箱里备用,防止DNA降解。
    (12)制作浓度为1%的琼脂糖凝胶,进行电泳(U=150V,电泳时间约为30 min),用成像仪进行拍照并查看结果。
    实验中应注意如下事项:
    (1)实验试剂如Proteinase K,应避免反复冻融,否则会造成提取效果不好、提取的量下降;
    (2)如果缓冲液GA或GB中出现沉淀,可先放入37℃的烘箱中使其重新溶解,将其摇匀后再使用;
    (3)离心使用的都是台式离心机,并且都是在室温下进行的。
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