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摘要：为明确细胞色素P450在绿盲蝽毒死蜱抗性中的作用，本文通过转录组测序技术分析了绿盲蝽毒死蜱抗性品系中细胞色素P450超基因家族的表达水平，同时利用实时定量PCR方法验证了相应P450基因的相对表达量。转录组数据分析表明：在绿盲蝽体内共有75个P450基因，与敏感品系SLF和BZS相比，毒死蜱抗性品系BZR有6个P450基因表达量显著上升，分别为CYP6A20、CYP6A14、CYP6X1v1、CYP6B6、CYP6BS1、以及CYP4ac1。而实时定量PCR验证的结果则表明在BZR品系中仅CYP6B6、CYP6BS1、CYP6a20和CYP6X1v1基因的表达量明显提高，分别为SLF品系中的9.21、7.38、7.90和2.86倍，差异达到显著水平。因此可以推断，CYP6B6、CYP6BS1、CYP6a20和CYP6X1v1可能参与了绿盲蝽BZR品系毒死蜱抗性的形成。26628
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毕业论文关键词：绿盲蝽；P450基因；毒死蜱；抗性
The relative expression of P450 genes in the resistant strain to chlorpyrifos of Apolygus lucorum
Abstract：Relative expression of P450 genes in chlorpyrifos-resistant strain (BZR) was analyzed using transcriptome sequencing and confirmed by quantitative real-time PCR to indentify the role of P450 genes in the resistance of Apolygus lucorum to chlorpyrifos. Transcriptome sequencing data showed that the relative expression level of 6 among 75 P450 genes in BZR were up-regulated. These genes were CYP6A20, CYP6A14, CYP6X1v1, CYP6B6, CYP6BS1 and CYP4ac1. QrtPCR on these genes showed only CYP6A20, CYP6X1v1, CYP6B6, CYP6BS1 were significantly higher expressed. The expression of these genes in BZR was 9.21-, 7.38-,7.90- and 2.86-fold higher than that in susceptible stain SLF. These results indicated CYP6A20, CYP6X1v1,CYP6B6, CYP6BS1 might be involved in the resistance to chlorpyrifos of A. lucorum.
Key words: Apolygus lucorum；Cytochrome P450 gene；Chlorpyrifos；Resistance
目 录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 供试昆虫 2
1.2 主要试剂和仪器2
1.2.1 主要试剂2
1.2.2 主要仪器设备2
1.3 试验方法2
1.3.1 转录组测序2
1.3.2 转录组数据分析2
1.3.3 绿盲蝽总RNA的提取3
1.3.4 RNA质量检测3
1.3.5 定量反转录3
1.3.6 荧光实时定量PCR3
2 结果与分析4
2.1 P450基因转录组测序结果4
2.2 P450基因定量PCR产物熔解曲线和扩增效率一致性分析5
2.3 P450基因表达量的定量验证5
3 讨论6
致谢7
参考文献7
图 1 定量PCR扩增效率5
图2 P450基因在不同绿盲蝽品系中的相对表达量6
表1 引物信息4
表2 绿盲蝽转录组解毒酶基因数据分析4
表3 绿盲蝽转录组P450基因数据分析5
绿盲蝽毒死蜱抗性品系中P450基因相对表达量的变化
引言
与其他生物体相同，昆虫细胞色素P450单加氧酶（cytochrome P450，P450/CYP/CYP P450) 也是多功能氧化酶系（mixed function oxidases，MFO)的末端氧化酶，可与底物结合以及从还原型辅酶Ⅱ（NADPH）传递电子到细胞色素P450还原酶，在MFO系统的氧化代谢功能中起核心作用。昆虫细胞色素P450不仅参与内源活性物质（如固醇类激素、脂类等）的合成及代谢过程，同时在杀虫剂、植物毒素等外源化合物的代谢中也起着重要作用（Feyereisen，2012)。
细胞色素P450底物广谱，可代谢不同结构的杀虫剂，由P450介导的解毒代谢增强是昆虫对有机氯类、有机磷类、拟除虫菊酯类和烟碱类等多种类型的杀虫剂产生抗性的重要机制(Estabrook, 1996)。昆虫对有机磷杀虫剂代谢能力的增强及抗性产生与抗性昆虫中细胞色素P450基因的过量表达密切相关。家蝇（Musca domestica）二嗪磷抗性品系Rutgers中cyp6a1 mRNA水平至少为敏感品系的10倍(Carino et al.，1994)；黑腹果蝇抗性品系91-R中cyp6a2的表达水平是敏感品系的20-30倍，这也是导致该品系对DDT和马拉硫磷产生高水平抗性的主要原因(Waters et al.，1992)；灰飞虱中3种P450基因CYP6AY3v2、CYP306A2v2、CYP353D1v2的过量表达，导致了其对毒死蜱的代谢抗性(Xu et al., 2014)。