Lb 葡萄毛菇(Hebeloma vinosophyllum)
F26 乳牛肝菌(Suillus bovinus)
Cg 土生空团菌(Cenococcum geophilum)
Zjj2 未鉴定
F1 硬皮地星(Astraeus hygrometricus)
NJ1 赤壳属(Cosmospora sp)
X16 胞子丝菌属(Sporothrix sp)
K3 伞菌属(Agaricus sp)
K16 (Gaestrum sp)
N4 环粘盖牛肝菌(Suillus luteus)
F22 须腹菌属(Rhizopogon sp)
Tq 豆马勃属(Pisolithus.sp)
K11 垫状牛肝菌(Boletus pulverulentus)
SQLA 双色蜡蘑(Laccaria.sp)
Pt 彩色豆马勃(Pisolithustinctorius)
K6 赭盖捕蝇蕈(Amanita rubescens)
F17 (Rhizopogon sp)
1.1.3 Kottke培养基:
葡萄糖10.0g/L,无水CaCl20.05g/L,NaCl 0.025g/L, KH2PO4 0.5g/L, (NH4)2HPO4 0.5g/L,MgSO4`7H2O 0.15g/L,FeCl3`6H2O 0.01g/L,VB1 0.1mg/L,KCl 37.3mg/L,H3BO3 15.5mg/L,MnSO4`H2O 8.5mg/L,ZnSO4`7H2O 5.8mg/L,CuSO4`5H2O 0.13mg/L,(NH4)6Mo7O24 0.2mg/L)。
1.1.4菌种活化及菌液的制备:
Kottke培养基在1.21×105 Pa、121℃条件下高温、高压灭菌15min,待冷却至50℃倒入灭菌培养皿,制备成固体培养基。将实验室分离保存的27种供试菌株接种到灭菌培养皿中,置于25℃恒温箱内活化14天。配制不加琼脂的Kottke培养基,分装于250ml的三角瓶中,每个三角瓶中装200ml培养基,在1.21×105 Pa下高温灭菌15min。用打孔器取活化后母菌培养基外沿生长活跃处(直径8mm)菌块,接种到上述三角瓶中,置于25℃,150rpm摇床中培养一个月。将培养好的真菌发酵液体转移到50ml离心管中,5000 rpm离心10 min,上清液用作浸提剂。
1.2实验一
1.2.1.浸提剂及浓度设置:
对外源添加的Cr污染基质进行EDDS(1,5,10 mM),NTA(0.1,0.5,1mM), EDTA2Na(1,5,10mM)及27种真菌发酵液的浸提处理。
样品处理:称取基质样品1.00g,浸提液与基质样品混合,液固比为10:1并装于50ml离心管中,每个处理设置3个重复,将离心管置于摇床中200 rpm振荡12 h,振荡完成后,5000 rpm离心10 min,转移上清液到20 ml的注射器中,过0.45um的水相滤器并转移滤液到15 ml离心管中,用原子吸收光谱仪(AAS)检测浸提液中的总Cr含量。
1.2.2螯合剂处理时间梯度试验:上述选出的最佳螯合剂做一个时间动态,即螯合剂施用到土壤后,土壤中可溶解性重金属含量的变化趋势,筛选出螯合剂处理的最佳时间。
样品处理:称取基质样品1.00g,浸提液与基质样品混合,液固比为10:1并装于50ml离心管中,每个处理设置3个重复,将离心管置于摇床中200 rpm振荡,分别于2、4、6、8、12、24、48h后取出相应离心管,5000 rpm离心10 min,转移上清液到20 ml的注射器中,过0.45um的水相滤器并转移滤液到15 ml离心管中,用原子吸收光谱仪(AAS)检测浸提液中的总Cr含量。
1.3实验二
1.3.1盆栽实验
将121℃灭菌2h后的基质进行5次干湿平衡后装入花盆(口径10 cm,深度8 cm),每盆85g。其中Cr浓度处理为0mg/kg或400mg/kg;从6月龄Pt菌根化苗与非菌根化苗(NM)(接种率高于80%)中挑选接种率大于80%的苗用于实验,Cr处理3个月后处理组添加螯合剂,每盆添加50ml,使土壤含水量刚好达到饱和状态,对照组施加相同体积的去离子水(W),添加螯合剂后7天取苗测量地上部、地下部长度,整株干重,消煮测定植物体内Cr含量。
1.3.2根袋实验
将基质进行5次干湿平衡后称35g(不含Cr)装入50ml离心管中,离心管底部削平后用专用滤网(菌丝能够通过而根系无法通过)封住底部并置于花盆(口径13.5 cm,深度11.5 cm)中,每盆300g基质。花盆中Cr浓度处理为0mg/kg或400mg/kg;外生菌根真菌化苗为6月龄Pt菌根化苗(接种率高于80%)与非菌根化苗(NM)。Cr处理3个月后,处理组添加两种浓度的螯合剂(CgL,CgH),每盆添加150ml,使土壤含水量刚好达到饱和状态,对照组施加相同体积的去离子水,添加螯合剂7天后收苗,取苗测量地上部、地下部长度,整株干重,消煮测定植物体内Cr含量,取花盆中基质样品测定基质中脲酶活力,酸性磷酸酶活力。
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