大豆是我国四大粮食作物之一,在豆类作物中蛋白质含量居首位,其中含有人体所必需的各种氨基酸,还有文生素A、B、C和D,并富含可食用的油脂,故为重要的蛋白质和油料作物。豆油除供食用外,可制油漆、肥皂、甘油、润滑油,还可制造人造羊毛,又为医药原料。自建国开始,中国一直是世界上最大的大豆生产国和出口国,现在随着国内经济的快速发展和大众膳食结构的逐步蛋白化,我国民众对大豆的需求量显著增加。因此,本实验选取大豆为材料,研究不同浓度的BPA对大豆作物幼苗根系活力及根长,鲜重的影响[4],研究BPA对农作物的环境毒理学性质,为评价双酚A的环境污染提供理论依据[20]。
1.试验器材
1.1试验材料
本试验选用中黄57、中黄43、庆丰一号三种大豆种子。
1.2主要试剂与仪器
1.2.1药品
双酚A、乙酸乙酯(分析纯)、霍格兰氏营养液、营养土、次硫酸钠(Na2S2O4,分析纯)粉末、蒸馏水、95%乙醇、琥珀酸、硫酸、TTC(氯化三苯基四氮唑)。
1.2.2仪器
电子天平(感量0.001g)、剪刀、纱布、滤纸、直尺、烧杯、玻璃棒、移液管、吸耳球、研钵、托盘、纱布、漏斗、滤纸、容量瓶、光照恒温培养箱、可见分光光度计、pH试纸(5.5-9.0)、刻度试管、试管架、纸杯(直径10cm)、药勺。
2.试验方法
2.1试剂配制
1、配制75%的乙醇溶液,用以试验的大豆种子消毒。
2、分别配制0、10、20、50、75mg/L的双酚A溶液,现用现配。
3、1%TTC溶液:准确称取TTC1.0g,溶于少量水中,定容到100mL。用时稀释至需要的浓度。
4、0.4%TTC溶液:准确称取TTC0.4g,溶于少量水中,定容到100mL。
5、磷酸缓冲液(1/15mol/L,pH7.0)。
6、1mol/L硫酸:用量筒取比重1.84的浓硫酸55mL,边搅拌边加入盛有500mL蒸馏水的烧杯中,冷却后稀释至1000mL。
7、0.4mol/L琥珀酸:称取琥珀酸4.72g,溶于水中,定容至100mL即成。
8、配制霍格兰氏营养液,其配方如下:
表1 霍格兰氏营养液
营养液所需药品 浓度 微量元素液 浓度 铁盐溶液 用量
四水硝酸钙 945ml/L 碘化钾 0.83mg/L Feso47H2O 2.78g
硝酸钾 506mg/L 硼酸 6.2mg/L EDYA-Na 3.73g
硝酸铵 80mg/L 硫酸锰 22.3mg/L 蒸馏水 500mL
磷酸镁 493mg/L 硫酸锌 8.6mg/L pH=5.5
铁盐溶液 2.5ml/L 钼酸钠 0.25mg/L
微量元素液 5ml/L 硫酸铜 0.025mg/L
氯化钴 0.025mg/L
pH=6.0
2.2双酚A处理下的种子
挑选均匀饱满的大豆种子,用75%的乙醇浸泡8s左右进行种子消毒处理,然后用蒸馏水冲洗3遍。采用常规的纸床发芽法来进行大豆种子催芽[2],托盘内铺两层与托盘底大小相等的滤纸,并在滤纸上铺一层纱布,然后将清洗干净的大豆种子分别置于其上,每盘200粒种子,每个品种两盘,且浇蒸馏水淹没滤纸至种子,将托盘放入光照培养箱,温度设为为25℃,黑暗条件下培养。发芽期间每天用喷壶补充蒸馏水,以保证大豆种子处于湿润状态,进行正常发芽,早晚照看两次,待长出根时取幼苗移栽培养。
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