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摘要：目的：克隆菲牛蛭的Guamerin基因，探究吸食对其表达的影响，同时确定菲牛蛭Guamerin基因的最佳时空表达模式。方法：对菲牛蛭的Guamerin基因进行克隆鉴定和测序，通过RT-PCR对Guamerin基因进行定量分析。结果：菲牛蛭的各个组织的Guamerin基因相对表达量在吸食的过程中都会出现明显的涨幅，但是各个组织出现的时间段不尽相同。结论：吸食对于菲牛蛭体内的Guamerin的基因表达有着促进作用，促进的效果与体内不同的组织和吸食阶段有关。29793
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毕业论文关键词：菲牛蛭；Guamerin基因；吸食；定量分析；基因克隆
Cloning of the Guamerin gene in Poecilobdella manillensis and the effects of its expression by sucking
Abstract：Objective: By cloning the Guamerin genes of Poecilobdella manillensis Lesson. Research the effects of suck on its expression. At the same time,determine the best space-time expression patterns of P. Manillensis Guamerin gene.Methods: Cloning identification and sequencing of the Guamerin gene in P. Manillensis.The Guamerin gene was quantitatively analyzed by RT-PCR.Results: The relative expression of Guamerin gene will show a significant increase in the course of suck.But different organizations have a significant increase in the period is not the same.Conclusion: Suck has a positive effect to the expression of Guamerin gene in P. Manillensis.The effect of the promotion is related to the different tissues and sucking stages.
Key words：Poecilobdella manillensis Lesson；Guamerin gene;suck;quantitative analysis;gene cloning
摘要 3
关键词 3
ABSTRACT 3
KEY WORDS 3
引言 3
1 材料与方法 4
1.1 试验材料 4
1.2 实验仪器与试剂 4
2 实验方法 4
2.1实验设计 4
2.2引物设计与合成 5
2.3 RNA的提取与鉴定 5
2.4目的基因克隆 5
2.5 Guamerin基因的时空表达分析 7
3 结果与分析 7
3.1菲牛蛭Guamerin基因的生物信息学分析 7
3.2菲牛蛭Guamerin基因同源性分析及构建系统进化树 8
3.3菲牛蛭Guamerin基因表达量特征分析 9
4 讨论 11
致谢 12
参考文献： 12
菲牛蛭Guamerin基因的克隆和吸食对其表达的影响
引言
菲牛蛭(Poecilobdella manillensis Lesson)俗称金边蚂蟥,别名马尼拟医蛭,在动物分类上隶属于环节动物门(Annelida)、蛭纲(Hirudinea)、无吻蛭目(Arhynchob-dellida blanchard)、医蛭科(Hirudinidae whitman)、牛蛭属(Poecilobdella ),是吸血类水蛭中个体较大的品种,生活在稻田、水沟、江河或池塘里,以吸吮人和脊椎动物（如牛、青蛙等）的血液为生，主要分布于我国华南的广西、广东、福建、海南和香港，国外主要分布于菲律宾、印度尼西亚、泰国、越南等[1][2][3]。我国古代医书中有很多用菲牛蛭治疗各种疾病的记载，《神农本草经》记载到“主逐恶血、瘀血、月闭、破血瘕积聚、无子，利水道……”[4]；李时珍的《本草纲目》也有提起：“咸走血，苦胜血。水蛭之咸苦，以除蓄血，乃肝经血分药，故能通肝经聚血”[5]；医圣张仲景也曾用其祛邪扶正，治疗“水结”、“瘀血”之症，显示了其独特的疗效，后世张锡纯也有称赞水蛭“存瘀血而不伤新血，纯系水之精华生成，于气分丝毫无损，而血瘀默然于无形，真良药也”。在公元1500年前，埃及人首创出水蛭放血疗法。18世纪末到19世纪，欧洲人甚至迷信菲牛蛭能吮去人体内的病血，不论头痛脑热一概使用菲牛蛭进行吮血治疗，1829~1836 年，仅法国巴黎医院就约有 500~600万人使用过菲牛蛭吸血疗病，每年消耗菲牛蛭约800~5700万条[6]。