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Sephadex LH-20洗脱溶剂分为反相和正相两种。用得最多的是反相溶剂洗脱，以甲醇－水系统最为常见，先用水，逐渐增加甲醇比例，最后用100%甲醇冲柱。正相系统以氯仿－甲醇最为常见，先用50%氯仿－甲醇，逐渐增加甲醇比例，最后用100%甲醇冲柱。
2.1.2.3 C18反相柱层析
相对于硅胶层析（正相层析），C18层析是反相柱层析。其分离原理与硅胶柱相反，一般情况下极性较小的物质易被吸附，极性较大的物质不易被吸附，整个层析过程也是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。 C18即十八烷基硅烷键合硅胶填料，这种填料在反相色谱中发挥着极为重要的作用，它可完成高效液相色谱70～80％的分析任务。由于C18是长链烷基键合相，有较高的碳含量和更好的疏水性，对各种类型的生物大分子有更强的适应能力，因此在生物化学分析工作中应用的最为广泛。
2.1.2.4 薄层色谱
薄层色谱（thin-layer chromatography, TLC）,也称薄层层析，是一种简便、快速、微量的色谱分离方法。它兼备了柱色谱和纸色谱的优点，常用作柱色谱的先导，用来预试摸索柱色谱的洗脱条件。一般是将作为固定性的吸附剂均匀涂布导平面载板上，如铝箔、塑料板、玻璃板等，形成一薄层，将样品点样于薄层上，然后借助展开剂的移行，根据各组分的吸附性能、分配系数的差异来达到分离的目的。在天然产物化学成分的研究中，TLC主要应用于摸索柱色谱的分离条件、化学成分的鉴定及化学成分的预试验等。
用薄层色谱法进行天然产物化学成分的鉴定，最好有标准样品同步进行同薄层板色谱。如用两种以上的展开系统展开后，标准品和待鉴定品的Rf值、斑点形状颜色都完全相同，则可初步推断是同一化合物，但一般还需仪器分析方法加以核对。
用薄层色谱法探索柱色谱的洗脱条件，是实验室的常规方法。在进行柱色谱分离时，首先要考虑选用合适的洗脱剂与吸附剂。通过薄层的预实验，就可以探索到0.2～0.3的溶剂系统可选为柱色谱的溶剂分离系统。
2.1.3 化合物结构鉴定的主要方法