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摘要：乙酰转移酶2（establishment of sister chromatid cohesion N-acetyltransferase 2, ESCO2 ）是人体内ECO1的同源物之一，具有调节姐妹单色单体的凝聚，修复DNA双链断裂损伤的作用。然而它在卵母细胞减数分裂中的作用尚不清楚。在本实验中，我们在小鼠卵母细胞中检测到了ESCO2定位在染色体轴线空隙，与黏连蛋白亚基定位相同。而通过siRNA基因沉默的ESCO2，也导致了小鼠卵母细胞发育成熟的过程中，多种纺锤体缺陷和染色体排列异常现象。另外通过染色体铺片实验，我们还观察到ESCO2沉默的MII期卵母细胞中，非整倍体发生率较高。因此，这些数据表明ESCO2在调节纺锤体的组装和保证小鼠卵母细胞中的整倍体，起到了重要作用。31594
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毕业论文关键词：ESCO2；纺锤体组装；染色体排列；非整倍体
ESCO2 functions in spindle assembly during mouse oocyte meiosis
Abstract： The primary functions of establishment of sister chromatid cohesion N-acetyltransferase 2 ( ESCO2)，one of a homologue of ECO1 in human body, is to regulate the aggregation of sister chromatid, hence it play a crucial role in the repair of DNA double strand breaks in cells. However, its roles during oocyte meiosis remain intricate. In the experiment, we document that ESCO2 localizes at spindle gap around the chromosomes the same as the subunits of cohesin by immunofluorescence and confocal microscopy. And depletion of ESCO2 by siRNA-based gene silencing results in various spindle defects and chromosome misalignment during oocyte meiotic maturation. In addition, we find that a higher incidence of aneuploidy is generated in ESCO2-depleted MII eggs by chromosome spreading. In light of all above, these data reveal that ESCO2 plays a significant role in regulating spindle assembly and thus ensuring the euploidy in mouse oocytes.
Key words: ESCO2；spindle assembly；chromosome alignment；aneuploid eggs
目 录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
绪论3
1材料与方法4
1.1实验动物4
1.2实验抗体与试剂4
1.3 卵母细胞采集与培养5
1.4 siRNA显微注射5
1.5 免疫荧光与激光共聚焦显微镜检测5
1.6免疫蛋白印记法（Western Blot）6
1.7 染色体铺片7
1.8 数据统计与分析7
2结果与分析 7
2.1 ESCO2在小鼠卵母细胞减数分裂期间定位在染色体轴线空隙7
2.2 ESCO2对文持小鼠卵母细胞正常的纺锤体形成和染色体排列有重要作用8
2.3 ESCO2对小鼠卵母细胞整倍体的文持具有重要作用9
3讨论 10
参考文献11
致谢 11
图1ESCO2的定位 8
图2WB实验结果9
图3纺锤体及染色体异常统计9
图4染色体铺片实验数据统计10
ESCO2调控小鼠卵母细胞染色体黏合的分子机制
绪论
减数分裂的正常进行是产生健康的雌配子和雄配子的基础，其中包括通过同源染色体的重组和分离来产生单倍体配子[1]。而在减数分裂中的错误导致非整倍性是主要的已知流产和大部分遗传性生长缺陷的原因[1][2]。姐妹染色单体的凝聚力是正确的染色体分离的先决条件，它是在DNA复制中通过黏连蛋白以及它的调节因子建立的。黏连蛋白是凝聚姐妹染色单体的介导元件，其对于S/G2期通过同源染色体重组的方式有效的修复DNA是至关重要的。这种凝聚力使得染色体能够正确的排列，准确的分离，以保证遗传物质的传送[2][3]。
黏连蛋白是一种可以圈住DNA的环状的复合体，由4个亚基组成分别是：Smc1，Smc3，Mcd1 / Scc1 / Rad21和Scc3 / SA1 / SA2[2][3]，其中Smc1和Sm3属于染色体结构文持（Structural Maintenance of Chromosomes, SMC）超家族，该家族成员在原核生物中就已经发现，并在进化中保留了下来。除此之外，该家族还有Smc5、Smc6等成员 [1][10]。MCD1 / SCC1 / RAD21亚基称为kleisin亚基[3]。