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参考文献 19
引言
橙花，属于芸香科柑橘属植物，主要产地在法国南部，埃及，意大利等国，利用蒸馏法获得的精油也就是橙花精油。橙花精油的主要化学成分之一是橙花醇。橙花醇（cis-3,7-Dimethyl-2,6-octadienol –Nerol-Lorena）它是目前一些香精油的主要成分之一，也是一种比较贵重的香料，橙花醇来源于芸香科植物，如甜橙，忍冬科植物如忍冬等，天然的橙花醇一般存在橙花油中[1]，在香料工业中，人们通过合成的方法获得橙花醇，由于橙花醇的获得总是会伴随着香叶醇的出现，所以在工业上通常会利用精馏的方法获得高纯度的橙花醇。橙花醇不但在各种香精中频繁活跃，而且在食品添加剂中也广泛应用，根据美国食品香料和萃取物制造者协会（FEMA）[2]和食品添加剂联合专家委员会（JECFA）对橙花醇的研究，橙花醇是一种比较安全的食用香料，而且我国也将其列入可食用香料的名单中[3]。除了上面所说的橙花醇的用途外，它还有一定的平哮喘，抗真菌，抗氧化等作用[4]。学术界关于橙花醇在食品，精油中的应用研究颇为深入，但是对于它在抗氧化，抗真菌这种作用机制的研究很少[5]。1998年，Caccioni在文章中指出，芸香科植物的挥发油对细菌有抑制的作用，并且，国内学者也有大量研究表明[6]，柑橘属挥发油有一定的抑菌作用。由于橙花属于芸香科柑橘属植物，因此，研究橙花醇的抗真菌作用机理可进一步补充这一领域的研究。
研究抗真菌的作用机理可通过黑曲霉和黄曲霉进行，它们都是曲霉菌真菌属中比较常见的两类。黄曲霉（A. flavus）是存在于一些发霉的粮食以及其他一些霉变的有机物上，1993年，黄曲霉毒素被世界卫生组织认定为毒性很强并且天然存在的有毒物质[7]。黄曲霉结构比较疏松，它的表面呈现灰绿色，菌落繁殖较快，它的最适生长温度为37 ℃左右。黄曲霉的有些菌系产生的黄曲霉毒素对肝脏组织有很强的破环作用，严重时会引起中毒死亡。黑曲霉 （A. niger）[8]也是一类有毒的丝状真菌，它的最适生长温度也是37 ℃左右，表面呈现黑褐色，表面粗糙或者平滑，它的菌丝发达且多分支，有隔膜，分布于粮食，土壤中，在潮湿的环境中，会引起食品，蔬菜等的霉变，有时会产生有毒的黄曲毒素霉，从而危害人和动物的健康。
真菌的细胞膜对文持细胞内部环境的稳定具有重要作用，它主要由脂质，糖类等组成，破坏了细胞膜，将会影响细胞的生理功能。线粒体作为真核细胞中比较重要的细胞器，不但控制着ATP的合成，为生命的活动提供能量，还与ROS的生成密切相关[9]，正由于线粒体控制着这两种重要的过程，所以线粒体决定着生物的生长，发育，衰老，乃至死亡，对生物个体具有重要意义，因此，线粒体是细胞中调节细胞凋亡的中心。
所以，研究天然的抑菌剂来防止粮食谷物中霉变的污染显得尤为重要，本次实验，通过调节橙花醇挥发油的浓度，对黑曲霉和黄曲霉进行甾醇含量分析，细胞膜损伤的测定，线粒体膜电位的测定以及ROS测定，从而来探究橙花醇挥发油对黑曲霉和黄曲霉的抑制机理。实验结果充分揭示橙花醇的抗真菌作用机制。
1 材料与方法
1.1供试材料
1.1.1 原料
橙花醇: 购买于阿拉丁试剂有限公司；
黑曲霉：生命科学学院实验室提供；
黄曲霉：生命科学学院实验室提供。