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摘要：本文以哈茨木霉为材料，对其所分泌的 ACCD（1-氨基环丙烷-1-羧酸）酶进行了分析。SDS-PAGE蛋白电泳结果表明，ACCD酶大小为37KDa，与预期结果一致，可见光分光光度计法测定酶活的结果表明，所分泌酶具有一定的活性，最高可达80.39 U/L。粗酶液浓缩后对小麦进行了处理，结果表明粗酶液对小麦的鲜重，株高，根长，根数均有促进作用，且在V酶液:V水=1:1时，效果最为明显。40366
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毕业论文关键词：哈茨木霉； ACC合酶； 活性测定； 功能分析
Functional Analysis of ACCD Enzyme from Trichoderma harzianum
Abstract: In this paper, Trichoderma harzianum as materials, the secretion of 1-aminocyclopropane-1-carboxylate (ACC) synthase (ACCD) enzyme were analyzed. SDS-PAGE results showed that the size of ACCD enzymes 37kDa are consistent with the expected results. Enzyme activity measured by visible light spectrophotometer method showed that the enzyme had some certain activity and the maximum activity reached to 80.39 U/L. Fresh weight, plant height, root length, root number of wheat all increased after inoculation of crude enzyme. And the effect was the most obvious when V enzyme liquid: V water = 1:1.
Key word：Trichoderma harzianum；ACCD；Activity assay；Functional analysis
目 录
摘 要 1
引言 1
1. 材料与方法 2
1.1 试剂 2
1.2 实验仪器 2
1.3 哈茨木霉二次活化 2
1.4 哈茨木霉ACCD酶活分析 2
1.4.1 哈茨木霉ACCD酶诱导 2
1.4.2 哈茨木霉ACCD酶活性测定 3
1.5 SDS-PAGE电泳检测 4
1.6 ACCD酶功能验证 5
2. 结果与分析 5
2.1 ACCD酶活性测定 5
2.2 SDS-PAGE凝胶电泳结果 6
2.3 哈茨木霉ACCD酶功能验证 6
3. 结论 9
参考文献 10
致谢 12
哈茨木霉ACCD酶功能分析 引言
在逆境胁迫的情况下，植物会产生过量乙烯，抑制其正常生长[1]。乙烯生物合成途径如下：Met（蛋氨酸）→ SAM（S-腺苷蛋氨酸）→ ACC（1-氨基环丙烷-1-羧酸）→ 乙烯，催化SAM 生成 ACC 和腺苷的ACC合酶是高等植物乙烯合成途径中的限速酶，决定着乙烯产生的速率[2]。哈茨所产生的ACCD酶能够切断乙烯的前体ACC产生酮戊二酸和氨，从而降低乙烯含量，促进植物生长[3]本文针对哈茨木霉产生的ACCD酶进行功能分析，并联系实际将其功能应用于植物的生长发育方面。
1. 材料与方法
1.1 试剂
PDA，PD，SM液体培养基及无氨SM液体培养基，ACC（1-氨基环丙烷-1-羧酸），0.1 mol/l Tris缓冲液（pH8.5），甲苯，0.56 mol/l HCL，2,4-二硝基苯肼，2 mol/l NaOH，30% Acr-Bia储备液，1.5mol/l Tris-HCl分离胶缓冲液（pH8.8），1.0mol/l Tris-HCl浓缩胶缓冲液（pH6.8），蛋白电泳缓冲液（pH8.3），10% SDS溶液，10%过硫酸铵溶液，5×上样缓冲液，考马斯亮蓝R-250染色液，脱色液，蛋白Marker。
1.2 实验仪器
电子天平，高温高压蒸汽灭菌锅，超净台，移液枪，恒温培养箱，锥形瓶，烧杯，量筒，容量瓶，摇床，水浴锅，比色皿，蛋白垂直电泳仪，水平摇床，超净工作台，烧杯，恒温加热磁力搅拌器，玻璃棒，容量瓶，高压蒸汽灭菌锅，摇床，离心机，电子天平，电磁炉，水平摇床，可见光分光光度计等。
1.3 哈茨木霉二次活化
① 将冷藏于-20℃冰箱内生长于斜面试管中的菌种取出，无菌操作下（超净工作台）用接种环将少许培养物划线于PDA培养皿中，后将斜面试管置于-20℃冰箱。