抑病土 6.47±0.25 1.43±0.31 2.28±1.57 1.32±0.76 195±62 490±198
注:数值表示每个处理5个重复的平均值(±标准误).
1.1.2 供试作物
香蕉苗:巴西香牙蕉(Musa AAA Cavendish cv. Brazil),由海南省万钟实业有限公司组培厂提供。
1.1.3 供试菌种
香蕉的枯萎病病原菌(Fusarium oxysporum f.sp. cubense,FOC):由本实验室从海南香蕉种植园病区发病香蕉植株根际土壤中分离获得,已经通过回接实验确定其致病性,为香蕉土传枯萎病4号生理小种。
1.1.4 供试培养基和试剂
PDA培养基:将去皮的马铃薯200g切成1-2 cm小块,蒸馏水煮沸20 min后用4层纱布过滤,取滤出液,加入葡萄糖20g,琼脂20g,蒸馏水定容到1L,pH自然,115℃高压蒸汽灭菌30min。
1.1.5 仪器
灭菌锅;冷冻干燥机;荧光定量PCR仪(耶拿);核酸定量仪(NanoDrop 2000,Thermo Scientific,USA);梯度PCR仪;分根盒;离心机;摇床;光照培养箱;超净工作台;GC色谱仪(Agilent 7890B);质谱仪(LECO Chroma TOF PEGASUS HT)
1.2 实验方法
1.2.1 霍格兰营养液制备
改良霍格兰营养液配方[15]
1.2.2 土壤悬液制备
土壤悬液的制备方法参考Badri:称取50g土壤样品到装有250ml 去离子水的500ml组培瓶中,在30℃摇床上,以180 r·min-1的转速摇30 min,土壤悬液随后转移至离心管中,以2000r·min-1离心5min,取上清液备用。
1.2.3 病原菌孢子悬液制备
接种新鲜FOC到PDA平板上,28 ℃暗培养至产孢,用5 ml无菌水轻洗菌面,再经纱布过滤得到孢子悬液,混匀后吸取100 ul孢子悬液经血球计数板计数孢子浓度。
1.2.4 土壤微生物诱导的根系分泌物实验
水培分根试验于2016年10月—2016年12月在南京农业大学固体有机废气物资源化实验室进行,共设3个处理,每个处理3 个重复,每2 株香蕉为1 个重复:
I 1/2霍格兰营养液处理(H) II 导病土壤悬液处理(C) III 抑病土壤悬液处理(S)
1.2.5 植株培养
在光照培养箱中以30℃白天,28℃黑夜培养无菌香蕉苗,昼夜比为 16比8,光照强度10000勒克司,湿度70%,香蕉苗首先在灭菌后的1/2改良霍格兰营养液里长至5到6片真叶,根系分布均匀,再把分根盒左侧根室营养液分别换成1000ml CK,C和S处理,其中CK处理为经过高温高压灭菌的1/2改良霍格兰营养液,C和S均为土壤悬液加上等量1/2改良霍格兰营养液;右侧根室更换高温高压灭菌的1/2改良霍格兰营养液1000ml。分根盒