1材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1材料选择与处理
本试验选用南京农业大学句容实验基地多年生品种‘白罗莎’葡萄为试材。根据本实验室以往的研究证明,花前10天处理能达到98%的无核率[3]。在花蕾形成初期用40ppmGA浸蘸花穗,依据‘白罗莎’生长发育特性,分别于葡萄幼果膨大期、硬核期、第二次果实膨大期和转色期采集不同植株不同部位的果实样品。采集后样品用液氮速冻后保存于-20℃冰箱。
1.1.2基因组数据库序列来源
美国生物技术信息中心NCBI;葡萄全基因数据库;PLANTCARE(http://bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/plantcare/html/)。
1.1.3主要仪器设备
电泳仪;PCR仪;超低温冰箱;台式高速冷冻离心机;紫外凝胶成像系统;电热恒温水浴锅;电泳槽。
1.1.4主要试剂
dNTP MIX(TaKaRa)、 RNase-Free DNase(Promega)、Taq polymerase(TaKaRa)、DL2000 Plus DNAMarker、其他试剂均为国产分析纯。引物由上海生物工程有限公司合成,引物序列见表3。