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     2.1.2培养基

    内生菌分离培养基:LB培养基、TSA培养基、营养琼脂(NA)培养基、ISP2培养基。

    促生筛选培养基: 有氮培养基、SM 培养液、无氮培养基、无机磷培养基[6]。

    将以上培养基配置好后在高压灭菌锅内进行灭菌20 min,115℃的灭菌。

    SMA培养基: 向灭菌后的SM 培养基中加入已经通过细菌过滤器除菌后的1- 氨基环丙烷-1- 羧酸(ACC), 使其终浓度为6ml/L。

    剩余生理生化及酶学试验按照《放线菌快速鉴定与系统分类》[7]及《放线菌系统学-原理、方法及实践》[8]的方法进行。

    2.2促生能力的检测

    2.2.1分泌植物生长激素IAA能力的测定

    定性测定:配制5mg/ml的色氨酸溶液,通过微孔滤膜过滤除菌后,加入已经通过高压灭菌的有氮培养基,使得色氨酸的最终浓度为0.5mg/ml,将取5ml的培养液分装于灭菌的试管中。同时,挑取纯化后的菌株并接种于分装后的无菌试管中,28℃的摇床培养7天后!751·文~论^文'网www.751com.cn,使用移液枪取出1ml菌液并加入灭菌后的试管中,并加入2ml的 Sackowcki’s 显色剂[9]充分混匀,在室温下显色30分钟,溶液呈粉红色,则为阳性,说明该菌株产IAA。

    定量测定:按上述方法培养阳性菌株,在暗处放置20分钟后,测定其OD540值。每个菌株设置4个平行,采用分析纯的IAA稀释梯度制备而绘制其标准曲线。

    2.2.2产ACC能力的测定

    将菌株点接于SMA培养基上,在相同要求下的5次传代培养后,依然可以在以ACC为独一氮源的SMA培养基上发展的菌株,则为能产ACC脱氨酶的阳性菌株[10]。

    2.2.3产铁载体能力的测定

    将菌株点接于CAS检测培养基的平板中,放置在28℃培养箱中培养48小时左右后,观察菌落的周围是否泛起黄色晕圈。若有晕圈呈现,则说明该菌株拥有产生铁载体能力[11]。

    2.2.4固氮能力的测定

    将菌株接种于无氮培养基上,在28℃的条件下进行7天的培养后观察其生长状况[14],并在相同条件下转接5次,仍能在无氮培养基上生长的菌株,则为具有固氮能力的菌株。

    2.2.5解磷能力的测定

    将菌株点接在无磷培养基上,28℃培养5-7天,观察菌落一圈是否有溶磷圈呈现,若有该菌株则为阳性[12]。

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