Math Works,Pychophysics toolbox(MATLAB)软件
恒温培养箱:福意联,北京福意电器有限公司
2.1.3试剂的准备
10X Steinberg’s Stock:119g Hepes,34g Nacl,2.06g magnesium sulfate,o.8g calcium nitrate,0.5g potassium chloride,1liter water pH7.5
MS222:500mL Steinberg’s Solution和0.1g MS222 powder混匀,调节pH至7.4。
2.2方法
2.2.1对二甲苯的制备
对二甲苯母液为0.861g/mL,稀释1000倍,配成400mL溶液存放于棕色瓶中。即在通风厨中取400μL对二甲苯同时加入399.6mL双蒸水。
2.2.2FETAX测试
20世纪80年代早期,Dumont等建立了FETAX(frog embryo teraoyenesis array-Xenopus,FETAX)方法,是一种可以替代哺乳动物快速筛选发育毒物的方法,FETAX方法还可以用于评价水体污染[3]。通常我们使用青蛙胚胎致畸试验-爪蟾(FETAX)来评估污染物对胚胎的潜在致死性和致畸性,并可进行存活爪蟾幼体的组织病理学检查[5]。首先,通过对一雄一雌的非洲爪蟾进行配对,雌蛙注射600 IU,雄蛙注射300 IU,诱导交配`751^文*论|文\网www.751com.cn。当蛙卵成长到第47期时,对这个时期的蝌蚪进行试验。在实验中取120只蝌蚪,挑选的体表无损、活力良好蝌蚪个体各20只分别置于对二甲苯为0、1、2、2.5、3和4M的玻璃培养皿中,不同浓度的PX用10X Steinberg’s Stock来稀释。培养要求在通气环境下。蝌蚪的培养均放在20℃恒温培养箱中,观察蝌蚪生长状况,确定蝌蚪半数死亡的浓度,以及最低致死浓度。培养7天后,在试验结束时,记录所有蝌蚪存活和死亡数量的数据。幸存的幼体在MS222中麻醉,并记录畸形的幼体的数目。每个生物测定在相同的实验条件下重复三次。