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    2.3  通过F. oxysporum孢子萌发率确定碳酸氢钠、亚磷酸盐的最低抑菌浓度

    将分离的病原菌F. oxysporum接种在PDA培养基上,25 ℃恒温培养箱中培养1周。在无菌操作台上刮取孢子,并用纱布过滤收集纯净的孢子悬浮液。将F. oxysporum孢子悬浮液等量分别加入到含有100 mL PDB培养基的250 mL三角瓶中,调节溶液孢子终浓度为1.0×106 spores·mL-1,再分别加入不同浓度的碳酸氢钠(0、0.25%、0.5%、0.75% m/v)、亚磷酸盐(0、10mM、15mM、18mM)。其中亚磷酸盐溶液用KOH与H3PO3配制。25 ℃、200 rpm摇床中振荡培养,分别取3 h、4 h、5 h、6 h、7 h、8 h、9 h、10 h的溶液1mL,用光学显微镜统计孢子萌发率(当芽管长度大于等于孢子直径的1/2时视为孢子萌发),每次随机统计100个孢子的萌发率,做三组平行,确定2种物质的最低抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC)。

    2.4  利用显微镜镜头标尺通过十字交叉法测量最低抑菌浓度组F. oxysporum的芽管长度

    将分离的病原菌F. oxysporum接种在PDA培养基上,25 ℃恒温培养箱中培养1周。在无菌操作台上刮取孢子,并用纱布过滤收集纯净的孢子悬浮液。将F. oxysporum孢子悬浮液等量分别加入到含有100 mL PDB培养基的250 ml三角瓶中,调节孢子溶液终浓度为1.0×106 spores·mL-1。 PDB培养基中分别含有最适浓度的两种抑菌物质,空白PDB作为对照。25 ℃、200 rpm摇床振荡培养,并分别取8 h、9 h、10 h、11 h、12 h的PDB溶液,利用显微镜镜头标尺测量空白组及最低抑菌浓度处理组的芽管长度。每次随机统计100个孢子的芽管长度,做三组平行,整个实验重复两次。

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