1.1国内外研究现状
2材料和方法
2.1采样
2013年7月份、9月份,于天目山地区的低海拔、中低海拔及高海拔地区进行3次野外采样调查。主要采样路径是从禅源寺经太子庵、一里亭、三里亭、五里亭、七里亭、老殿而达仙人顶的登山大道;另一条采样路径是从禅院寺经浮玉山庄、忠烈寺最后到达红庙的公路山道。共采集苔藓样本241份,其中有效作为后期苔藓黄酮实验材料60份。
2.2材料处理
野外采样样本通过剪除、筛选到达初步分离纯化的目的,再对初步分离纯化的苔藓样本进行清洗、二次分离及纯化,并将其进行烘干、保存。最后得到绿色无其他杂质的苔藓样本,用以黄酮提取、抗氧化实验以及抑制乙酰胆碱酯酶活性的测定。并在显微镜和解剖镜下对所采样的所有原始样本进行图像摄取,通过参考相关资料及对照标本进行苔藓样品的种类鉴定,最终确定了39种苔藓样品。
2.3材料与仪器
苔藓植物样品均由杭州师范大学吴玉环教授鉴定,存放于HTC;蒸馏水(单蒸水和双蒸水);乙醇(A.R);乙酰胆碱酯酶(AchE,EC 3.1.1.7,SiIGMA 公司);醋酸-ß -萘醋、醋酸-ɑ-萘酯、Fast Blue B Salt(购于SIGMA公司);紫外-可见分光光度计(购自上海欣茂仪器有限公司);移液器,电子天平,恒温水浴锅(购自上海欣茂仪器有限公司);硅胶G板(青岛海洋化学试剂公司);超声波发生器(频率20kHz)。
2.4总黄酮提取液的制备
2.4.1)取采集之后清理干净的苔藓样本置于75℃的烘箱内烘干12h,烘干后粉碎,用电子天平准确称取苔藓样本粉末1g于100mL锥形瓶;
2.4.2)在1g实验材料中加入25mlL60%乙醇、25mL单蒸水,再在50℃恒温水浴锅内水浴2h;
2.4.3)水浴过的溶液超声提取20min,并将提取过的溶液抽滤,收集含有黄酮的滤液;
2.4.4)在滤渣中加入25mlL60%乙醇,再在50℃恒温水浴锅内水浴2h,重复3的实验步骤,最后将前后两次所得到的滤液合并,弃滤渣;
2.4.5)减压蒸馏回收乙醇至滤液仅剩5-7 mL为止,放置于100 mL容量瓶中,后用60%乙醇稀释至刻度,得样品液。